货号：050-05941
测序级 谷氨酰蛋白内切酶
Endoproteinase Glu C, Sequencing grade
用于生物化学
CAS ：66676-43-5
EC编码：3.4.21.19
EINECS编号：200-350-6
MDL编号：MFCD01324998
GHS ：警告
EC编码：3.4.21.19
EINECS编号：200-350-6
MDL编号：MFCD01324998
GHS ：警告
谷氨酰蛋白内切酶简介
使用蛋白酶裂解多肽链的条件较温和，因此氨基酸残基侧链的修饰（氧化，卤代，脱酰胺等）并不会发生，含有这些基团修饰（结合位点在碳水化合物链，脂类、磷酸酯，硫酸等）的多肽通常会以完整形式良好收率回收。在相同消解条件下，得到片段的重现性很好。蛋白质的一级结构分析使用高底物特异性的酶，因为从氨基酸组成可以大致预测片段数量及其平均大小。更重要的是，可以避免由于部分（非特异性）裂解导致分离复杂。
源自金黄色葡萄球菌V8的谷氨酰蛋白内切酶，是一种丝氨酸蛋白酶。其特异性取决于缓冲液和pH以及可能的切割位点周围的结构。在乙酸铵（pH4.0）或碳酸氢铵（pH7.8），Glu-C切割谷氨酸的羧基端肽链。在磷酸缓冲液（pH7.8）中，Glu-C会切割谷氨酸和天冬氨酸的羧基端肽链。据报道Glu-C在0.2% SDS（十二烷基硫酸纳）和4.0M尿素中有活性。
降解特异性：使用B链胰岛素(insulin Box)作为底物反应1小时后的速率：≥85 %
谷氨酰蛋白内切酶性质
外观：冻干粉末，不含盐
来源：金黄色葡萄球菌 V8
生物活性：≥ 15u/mg 蛋白质
来源：金黄色葡萄球菌 V8
生物活性：≥ 15u/mg 蛋白质
谷氨酰蛋白内切酶应用
- 获取表层蛋白（S-layer proteins, 来自嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC 12980）的蛋白水解片段，以进行亲和研究。
- 酶切天然VSTx-3肽（voltage sensor toxin 3）以测定序列。
- 重组纯化PimA（磷脂酰肌醇甘露糖转移酶）的部分蛋白水解。
- 糖化血红蛋白消解，用于液相-同位素稀释质谱联用分析。
谷氨酰蛋白内切酶产品列
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货号
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产品
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包装
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级别
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050-05941
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Endoproteinase Glu C, Sequencing grade
测序级 谷氨酰蛋白内切酶 Glu-C |
50ug
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生化试剂
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谷氨酰蛋白内切酶重组和蛋白酶活性：
- 碳酸氢铵缓冲液(pH 7.8) 或乙酸铵缓冲液 (pH 4.0): 该酶切割谷氨酸的羧基端肽链。
- 磷酸缓冲液 (pH 7.8): 该酶特异性切割谷氨酸和天冬氨酸的羧基端肽链。
特异活性：如标签所示。
25℃下使用 Z-Phe-Leu-Glu-4-nitroanilide作为底物。
纯度：单峰 (RP-HPLC)
纯度：单峰 (RP-HPLC)
样品： 20 μg谷氨酰蛋白内切酶
分离柱：Aquapore RP 300, 7 Fm 4.6H×100 mm.
溶剂A：水 (含0.1% 三氟乙酸)
溶剂B：乙腈：水＝70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
梯度：30 分钟 线性梯度 0-100％ B.
流速：0.5 ml/min.
检测波长：215 nm
分离柱：Aquapore RP 300, 7 Fm 4.6H×100 mm.
溶剂A：水 (含0.1% 三氟乙酸)
溶剂B：乙腈：水＝70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
梯度：30 分钟 线性梯度 0-100％ B.
流速：0.5 ml/min.
检测波长：215 nm
消解特异性：使用B链胰岛素作为底物，消解反应开始1小时后反应速率大于等于85 %
①Pre (1)-Glu (13), ②Ala (14)-Glu (21), ③Arg (22)-Ala (30)
消解液：100μg B链胰岛素＋10μg 谷氨酰蛋白内切酶溶于100μl碳酸铵缓冲液 (25 mmol/l, pH 7.8), 1 小时; 25℃
样品：10 μl 消解液＋90 μl碳酸铵缓冲液
柱子：Aquapore RP 300, 7 μm 4.6φ×100 mm
分离条件:
溶剂：乙腈：水＝70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
流速：0.5 ml/min
检测波长：215 nm
样品：10 μl 消解液＋90 μl碳酸铵缓冲液
柱子：Aquapore RP 300, 7 μm 4.6φ×100 mm
分离条件:
溶剂：乙腈：水＝70:30 (含0.1% 三氟乙酸)
流速：0.5 ml/min
检测波长：215 nm
贮存条件：在2-10℃下保存。等份溶液保存在-20℃下。
包装：50μg
包装：50μg
谷氨酰蛋白内切酶参考资料
(1) Houmard, J. and Drapeau, G. R. ：Proc. Natl. Acad. Sci.USA., 69, 3506 (1972)
(2) Drapeau, G. R. ：Can. J. Biochem ., 56, 534 (1978)
(3) Seetharama, R. and Seetharama, A., J. Cell. Biochem.,30, 87 (1986)
(2) Drapeau, G. R. ：Can. J. Biochem ., 56, 534 (1978)
(3) Seetharama, R. and Seetharama, A., J. Cell. Biochem.,30, 87 (1986)