货号：056-05921
测序级 天冬酰蛋白内切酶
Endoproteinase Asp-N, Sequencing grade
用于生物化学
CAS：9001-92-7
EC编码：3.4.24.33
EINECS编号：232-642-4
MDL编号：MFCD02253021
GHS : Danger
EC编码：3.4.24.33
EINECS编号：232-642-4
MDL编号：MFCD02253021
GHS : Danger
天冬酰蛋白内切酶简介
使用蛋白酶裂解多肽链的条件较温和，因此氨基酸残基侧链的修饰（氧化，卤代，脱酰胺等）并不会发生，含有这些基团修饰（结合位点在碳水化合物链，脂类、磷酸酯，硫酸等）的多肽通常会以完整形式良好收率回收。在相同消解条件下，得到片段的重现性很好。蛋白质的一级结构分析使用高底物特异性的酶，因为从氨基酸组成可以大致预测片段数量及其平均大小。更重要的是，可以避免由于部分（非特异性）裂解导致分离复杂。
天冬酰蛋白内切酶 Asp-N 是一种金属内切蛋白酶。它来自于Pseudomonas fragi的一个突变菌株。这种酶专一地切割蛋白质和多肽中天冬氨酸和半胱氨酸残基的N末端。抑制剂：抑肽酶、二异丙基氟磷酸（DFP）、亮肽和TLCK。特异性：以胰高血糖素为底物1小时后的反应率：≥90%。
天冬酰蛋白内切酶性质
外观：冻干粉末
来源：Pseudomonas fragi 突变种
比活：使用偶氮骨胶原蛋白(azocoll)作为底物，在37℃下，≥20000 units/mg 蛋白质
纯度：≥90 % (SDS-PAGE)
来源：Pseudomonas fragi 突变种
比活：使用偶氮骨胶原蛋白(azocoll)作为底物，在37℃下，≥20000 units/mg 蛋白质
纯度：≥90 % (SDS-PAGE)
天冬酰蛋白内切酶应用
- 因其对多肽的高度特异性剪切，在蛋白质组学中用于肽链分析和蛋白质序列工作。
- 用于特定蛋白质的消化以制备肽，并通过质谱法分析生成的肽结构。
天冬酰蛋白内切酶产品列表
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货号
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产品
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包装
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级别
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056-05921
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Endoproteinase Asp-N, Sequencing grade
测序级 天冬酰蛋白内切酶 |
2ug
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生化试剂
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天冬酰蛋白内切酶重组和蛋白酶活性：
重组：加入50μl无菌蒸馏水至10mmol/l Tris HCl缓冲液中溶解，pH7.5。
消解特异性：以胰高血糖素为底物，消解反应1h后，反应率达90%以上。
消解特异性：以胰高血糖素为底物，消解反应1h后，反应率达90%以上。
H-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Y-L-D-S-R-R-A-Q-D-F-V-Q-W-L-M-N-T Glucagon
① Asp (15)-Gln (20), ② His (1)-Ser (8), ③ Asp (9)-Leu (14), ④ Asp (21)-Thr (29)
① Asp (15)-Gln (20), ② His (1)-Ser (8), ③ Asp (9)-Leu (14), ④ Asp (21)-Thr (29)
消解液：100μg胰高血糖素＋10μg测序级天冬酰蛋白内切酶溶于磷酸钠缓冲溶液 (50 mmol/l, pH 8.0) 1小时，37℃下培养18小时。
样品：20 μl消解液
柱子：Shandon ODS Hypersil , 5 μm
分离条件：
溶剂A: Water (contain 0.1 vol% TFA)
溶剂B: Acetonitrile : H2O＝70 : 30 (contain 0.1vol% TFA)
梯度：20分钟线性梯度0-100% B
流速：1 ml/min
检测波长：215 nm
样品：20 μl消解液
柱子：Shandon ODS Hypersil , 5 μm
分离条件：
溶剂A: Water (contain 0.1 vol% TFA)
溶剂B: Acetonitrile : H2O＝70 : 30 (contain 0.1vol% TFA)
梯度：20分钟线性梯度0-100% B
流速：1 ml/min
检测波长：215 nm
贮存：2-10℃。等份溶液长期保存应置于-20℃冻存。贮存液在4℃可稳定保存2天，在-20℃可保存至1个月。
包装尺寸：2μg
包装尺寸：2μg
天冬酰蛋白内切酶参考资料
(1) Noreau. J. andDrapeau, G. R. : J. Bacteriol., 140, 911 (1979)
(2) Drapeau, G. R., : J. Biol. Chem., 225, 839 (1980)
(3) Laemmli, U. K., : Nature, 227, 680 (1970)
(2) Drapeau, G. R., : J. Biol. Chem., 225, 839 (1980)
(3) Laemmli, U. K., : Nature, 227, 680 (1970)