辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）

 

【名称】辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）
【货号】ECE0066M
【外观】冻干粉
【CAS】9003-99-0
【来源】Armoracia rusticana
【保存条件】-20℃保存
【有效期限】2 年

西宝生物辣根过氧化物酶的质量指标

 

每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基，该辅基在403nm波长处有最大吸收峰，而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。RZ(Reinheits Zahl)值即为HRP在403nm的OD值（血红素引起的吸收率）与275nm的OD值（蛋白质引起的吸收率）之比。

辣根过氧化物酶是目前使用广泛的一种标记酶，用来标记抗体或其它蛋白质，既能用于定位检测，也能用于定量测定。 辣根过氧化物酶（HRP）的从辣根根（Amoracia RUSTICANA）中分离。它是用于生物化学中的应用，如western印迹，ELISA和免疫组化。辣根过氧化物酶是用来放大弱信号，增加被探测的目标分子，如蛋白质。它通常被用于确定葡萄糖和溶液中的过氧化物的量。它也被用于在烟曲霉快速药敏测定。

 

辣根过氧化物酶HRP是目前在ELISA中应用为广泛的标记用酶，主要原因一方面是其易于提取，价格相对低廉；另一方面性质稳定，耐热及有机溶剂的作用，与抗原或抗体偶联后，活性很少受损失。西宝生物隆重推出用于免疫标记的辣根过氧化物酶HRP（RZ≥3.0，活性≥290U/mg），详情致电400-021-8158。以下就辣根过氧化物酶HRP标记抗体的过程做下详细介绍。

1) 透析膜依次浸泡于50%乙醇1h，10mmol/L NaHCO3　1h, 1 mmol/L EDTA 1h,在蒸馏水中洗两次并放于含0.01% (m/V)叠氮钠的0.1mol/L磷酸钠缓冲液，于4℃保存。
2) ≥1mg/ml抗体溶液(A280=1.44mg IgG/ml)对2L 0.1mol/L pH6.8的磷酸钠缓冲液透析，于4℃缓慢搅动下过夜。
3) 10mgHRP溶解于1ml0.1mol/LpH9.2的碳酸盐缓冲液，取0.25ml加入0.25ml新配制的1.71 mg/ml NaIO4溶液中，盖紧混匀，于室温下避光放置2h。
4) 取1ml透析后的抗体溶液和0.25g SephadexG-25加至0.5mlHRP/NaIO4混合液中。用玻璃棉塞紧巴斯德吸管管尖并用Parafilm封口膜封好。将抗体/葡聚糖凝胶/HRP混合物加人巴斯德吸管，室温下避光放置3h。
5 )柱子用0.75ml碳酸盐缓冲液洗脱偶联物。加38μl 5mg/mlNaBH4溶液至洗脱物中，室温下避光孵育30min。再加112μl 5mg/ml NaBH4溶液继续孵育60min。
6) 加0.9ml饱和硫酸铵溶液，于4℃下温和搅拌30min。于4℃，10000g离心15min。
7) 弃上清。沉淀重溶于0.75 ml TEN缓冲液中，装人透析袋于4℃对2 L TEN缓冲液透析过夜。更换TEN缓冲液再继续透析4h。
8) 从透析袋中取出偶联物，加BSA至20mg/ml。加等体积甘油，于-20℃保存。