将聚乙二醇链结合到生物制剂上，这个过程叫做生物制剂的PEG化。蛋白PEG化后可通过减缓蛋白水解和从免疫系统中遮蔽来延长半衰期。然而，重复注射PEG化蛋白可诱导产生抗-PEG抗体，使得清除的速率加快。为了帮助这一领域的研究，西宝生物供应小鼠，大鼠，猴抗-PEG IgM ELISA试剂盒，定量检测小鼠，大鼠和猴中抗-PEG IgM的浓度。

检测原理：

小鼠抗-PEG IgM检测试剂盒基于固相酶联免疫吸附原理。此试剂盒使用固定的单mPEG化BSA（20kDa PEG）作为捕获抗原（包被在微孔上），辣根过氧化物酶抗-小鼠IgM抗体复合物用于检测。稀释血清或血浆样品，同时在微孔板中培养标准品1小时。然后，清洗孔，加入HRP复合物孵育30分钟。抗-PEG IgM分子被夹在固定的PEG和检测抗体复合物之间。冲洗微孔去掉未结合的HRP标记的抗体，加入TMB试剂，室温下孵育20分钟，结果产生蓝色。加入终止液反应终止，颜色变为黄色，检测在450nm处的光密度。抗-PEG IgM的浓度与在450nm处的吸光度值成正比。

此试剂盒主要检测抗PEG聚乙二醇主链的抗体。

试剂盒中包含以下内容：

PEG-BSA包被的96孔板（12条，每条8个孔），在-20℃下储存
抗-小鼠IgM HRP复合物，50ul 。在-20℃下储存
参考标准品（冷冻干燥），2瓶。在-20℃下储存
20×HRP PEG冲洗液，50ml
HRP PEG稀释液，50ml
TMB试剂，11ml
终止液（1N HCL），11ml

需提供以下试剂或耗材：

移液器和枪头
蒸馏水或去离子水
聚丙烯或玻璃管
漩涡混合器
吸水纸或纸巾
微孔板培养仪（混合速度，150转/分钟）
平板垫圈
在450nm处光密度在0-4的平板阅读器
绘图软件

分析过程：

 1、保护支持板上合适数量的包被孔

 2、吸取100ul标准品和稀释样品到孔中（建议测试样品一式三份）

 3、在100-150转每分钟的微孔板振荡器上室温（18-25℃）孵育1小时

 4、使用1×清洗液清洗微孔5次，整个清洗过程要尽快完成

 5、在吸水纸或纸巾上急剧地敲击孔，去掉剩余的清洗液

 6、吸取100ul稀释的HRP复合物到每个孔中

 7、在100-150转/分钟的微孔板振荡器上，室温（18-25℃）孵育30分钟

 8、按照以上第4步或第5步清洗

 9、吸取100ul的TMB试剂到每个孔中。

 10、在微孔板振荡器100-150转/分钟，室温（18-25℃）轻轻混合20分钟

 11、加入100ul的终止液终止反应

 12、轻轻混合，确保颜色由蓝色变为黄色

 13、使用微孔板阅读器，在450nm处，5分钟内读取吸光值

结果分析：

1. 分别计算参考标准品和样品在450nm处的平均吸光值
2. 用平均吸光值和浓度值做标准曲线，Y轴是吸光值，X轴是浓度
3. 使用每个样品的平均吸光值来确定抗-PEG IgM的浓度值
4. 浓度值乘以稀释因子来计算出血清或血浆样品中抗-PEGIgM的实际浓度
5. 以上步骤使用电脑绘图软件进行绘制
6. 如果样品的吸光度值不在标准曲线范围内，样品需要重新稀释和检测

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