高效液相色谱法（HPLC）测定黄曲霉素

来源：Seebio.cn作者：西宝生物人气：-发表时间：2012-01-30 10:45:00【大中小】

GB 5009.24-2010，NY/T 1664-2008，SN/T 1664-2005，GB/T 8381-2008，SN 0637-1997

HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类，柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。

订货信息如下：

品名	级别	规格	应用	贮存及有效期
黄曲霉素B1	标准品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月
黄曲霉素B2	标准品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月
黄曲霉素G1	标准品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月
黄曲霉素G2	标准品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月
黄曲霉素M1	标准品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱		25支/盒(1ml) 15支/盒（3ml)	用于HPLC进行黄曲霉毒素M1含量的检测的样品预处理	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱		25支/盒	用于HPLC检测的样品预处理	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱（B1/B2/G1/G2）			用于HPLC检测的样品预处理	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月2
乙腈	色谱级	500ml/瓶	用作流动相	常温避光保存
甲醇	色谱级	500ml/瓶	用作流动相	常温避光保存
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱（B1/B2/G1/G2/M1/M2)			可用于样品中黄曲霉毒素总量（B1、B2、G1、G2、M1、M2）的样品提取、净化。	2~8℃，切勿冷冻，有效期为12个月

黄曲霉毒素亲和柱使用原理

品名	使用原理
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱	测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素M1经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素M1，然后注入到分析仪器中用于检测。
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱	同上
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱（B1/B2/G1/G2）	同上
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱（B1/B2/G1/G2/M1/M2)	同上

HPLC法分析食品中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2

一、实验条件
色谱柱：UltimateTM XB-C18，5μm，4.6×150mm
检测器：RF（荧光检测器）
波长：Ex：360nm Em：420nm
温度：柱温40℃
流动相：水/乙腈/甲醇=6/1/3
流速：0.8ml/min
柱后衍生反应：
反应液：0.05%的碘液
流速：0.2 ml/min
样品分析：饲料（用免疫亲和柱前处理）

二、谱图结果
色谱图如下，其中峰1为G2组分，峰2为G1组分，峰3为B2组分，峰4为B1组分，分离效果较好。