蛋白表达纯化技术外包服务

来源：Seebio.cn作者：西宝生物人气：-发表时间：2012-03-09 15:03:00【大中小】

西宝生物蛋白分离纯化平台为您提供专业的蛋白表达纯化外包服务，包括表达质粒构建及原核蛋白表达纯化、哺乳动物细胞蛋白表达纯化等，终产品可用于免疫学、结构分析、扩大培养及其他多种实验中。您还可以直接订购从基因合成到蛋白表达纯化的服务。

步骤1. 目标基因全基因合成：

1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因，免费提供给客户。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
3. 合成设计好的基因序列。

提供给客户：目标基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。
价格：3.80元/碱基，如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用．
时间：2-3周，根据基因的大小而定.详见全基因合成服务

步骤2. 目标基因亚克隆：

1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 免费提供如下表达载体：

Expression Vector	Promoter	Tag
pET3a, pET11a, pET24a	T7/ac	None or T7 Tag
pET32a	T7/ac	TRX & HIS
pET41a	T7/ac	GST & HIS
pET22b, pET25b, pET26b	T7/ac	Secret
pET28a, pET15b, pRSETb	T7/ac	HIS
pET50b, pET43a	T7/ac	Nus, HIS
pPEPTIDE	T7/ac	HIS
pMAL-c2x	T7/ac	MBP
pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P	T7/ac	GST
pQE30	T5	HIS
pTrcHisB	Trc	T7, HIS
pTWIN	T7/ac	Intein, CBD
pBV220	PRPL	None

提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
价格：免费　
时间：1-2周

步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：

1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
5. 可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
价格：免费
时间：1周

步骤4. 目标蛋白表达及纯化：

1. 摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

提供给客户：纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。
价格：

1. 如果目标蛋白含有亲和标签（His-tag or GST-tag）
    5,000元（目标蛋白纯度>80%，不切除标签）
    5,500元（目标蛋白纯度>90%，不切除标签）
    6,000元（目标蛋白纯度>80%，切除标签）
    6,500元（目标蛋白纯度>90%，切除标签）

2. 如果目标蛋白不含有亲和标签
8,000元（目标蛋白纯度>80%）
9,000元（目标蛋白纯度>90%）

3. 如果没有获得目标蛋白，则不收取任何费用(仅限客户直接提供构建好的质粒时)。

时间：2~3周

备注： 1. 因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同，我们最终根据实际情况将给客户提供最少1mg，最多10mg的目标蛋白，所收取的费用是相同的。
2. 我们提供的最终产品一般为保存于常规的缓冲液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸钠缓冲液）中蛋白质溶液，并且其中不含有尿素或盐酸胍等变性剂。
3. 每次Western blot检测最多7个样品，因为要加入阳性对照，阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测，如果需要更多次检测则费用为1500元/次。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗，如果客户需要使用其他一抗，则需要客户提供。详见 Western Blot 检测服务。