5分钟“get”生物制药中细胞培养的关键要点
细胞培养在生物制药中有着广泛的应用。它是一种利用细胞生长和分裂的能力来生产药物的方法。通过细胞培养技术，我们可以大规模地生产各种药物，如蛋白质药物、抗体药物和疫苗。
细胞培养技术在生物制药中的应用不仅可以提高药物的生产效率，还可以减少对动物实验的依赖，从而降低了药物研发的成本。然而，细胞培养也面临着一些挑战，如细胞的稳定性、培养条件的优化等。因此，我们需要不断改进和优化细胞培养技术，以满足不断增长的药物需求。
下面是细胞培养的一般流程：
细胞培养流程图（图片来源于网络）
细胞株的选择
CHO-K1细胞（FBQ1056A）
CHO-K1细胞是未经改造的野生型CHO细胞，具有较高的生长速度和较好的细胞质质量。CHO-K1是一种无血清培养的细胞系，这意味着它们可以在无需添加胎牛血清的培养基中生长和繁殖。CHO-K1细胞具有许多优点，使其成为生物制药领域中常用的细胞系之一。首先，CHO-K1细胞具有较高的蛋白质表达能力，可以有效地表达各种外源蛋白。其次，CHO-K1细胞对许多病毒和细菌的感染性较低，这使得它们在生产重组蛋白和疫苗时更加安全可靠。此外，CHO-K1细胞的遗传稳定性较高，可以保持长时间的稳定表达。
来源：Cricetulus griseus (ZG仓鼠) 卵巢
形态：表皮细胞
生长特性：贴壁
注释：CHO-K1由CHO衍生而来，CHO是T. T. Puck 在1957年从一只成年ZG仓鼠卵巢获得的。
培养液：Ham's F12K （含2 mM L-谷氨酰胺，1.5 g/L NaHCO3）， 10% 胎牛血清。
传代：吸去培养液。用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会YZ胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞都脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：4到1：8为宜，传代期间培养液更换1-2次）
冻存：95%培养液+5% DMSO冻存于液氮。
CHO-S细胞（FBQ0790A）
CHO-S细胞是一种变异的中国仓鼠卵巢细胞系，其特点是生长快速、易于培养和维持稳定的基因表达。CHO-S细胞在生物制药中的应用很广泛，特别是在重组蛋白质的生产中及单抗药物生产中。由于CHO-S细胞具有较高的蛋白质表达能力和较好的翻译后修饰能力，使其成为理想的生产宿主细胞。此外，CHO-S细胞还具有较低的病毒感染率和较高的细胞存活率，使其在生产过程中更加可靠和稳定。
HEK293细胞（FBQ0262A）
HEK293细胞极少表达细胞外配体所需的内生受体，且比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。293细胞的一个衍生株：293T/17（FBQ0507A）的转染效率更高，成为广大研究者研究基因功能的一个强大工具。
来源：人体肾脏
形态：上皮细胞
生长特性：贴壁
注释：该细胞含腺病毒5 DNA 。
培养液： MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠）， 10% 马血清（热灭活）。
传代： 吸去培养液。 用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。 加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞都脱落。 加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。 加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1：2到1：4为宜，传代期间培养液2-3天更换1次）
冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。
Vero细胞（FBQ0896A）
Vero细胞被成功的用来培养狂犬病疫苗、乙脑疫苗等多种疫苗，在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献，在医药研究种广泛应用。
来源：非洲绿猴肾细胞
形态：上皮细胞
生长特性：贴壁
注释：该细胞是日本千叶大学的Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年3月27日从一只正常的成年非洲绿猴肾组织培养出来的。
培养液：MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠）， 10%胎牛血清
传代：吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会YZ胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞都脱落。加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以1:3至1:6为宜，传代期间培养液每周更换2-3次）
冻存： 95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。
培养基的准备
准备适合细胞生长和生产的培养基。培养基通常包含营养物质、生长因子、激素和其他必要的成分，以满足细胞的需求。
CHO细胞化学成分限定培养基
|
货号
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产品名称
|
规格
|
特点
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|
SeeBM01 CHO基础培养基(液体)
|
1L
|
无动物源，化学成分限定培养基，不含水解物和生长因子。适用于CHO-K1SV。
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SeeBM01 CHO基础培养基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeBM02 CHO基础培养基(液体)
|
1L
|
无动物源，化学成分限定培养基，不含水解物和生长因子。适用于CHO-K1细胞系。
|
|
|
SeeBM02 CHO基础培养基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeBM03 CHO基础培养基(液体)
|
1L
|
无动物源，化学成分限定培养基，不含水解物；含有微量生长因子。适用于CHO-K1细胞系。
|
|
|
SeeBM03 CHO基础培养基(干粉)
|
10L、100L
|
||
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SeeFM01 CHO补料培养基(液体)
|
1L
|
液体补料A 含有60g/L 的葡萄糖（干粉不含葡萄糖），补料 B 不含葡萄糖。
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|
SeeFM01 CHO补料培养基(干粉)
|
10L、100L
|
HEK293细胞化学成分限定培养基
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货号
|
产品名称
|
规格
|
特点
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|
SeeHEK293CD01基础培养基(液体)
|
1L
|
无动物源，化学成分限定培养基，不含水解物，含微量生长因子适用于293F、293T、expi293细胞，用于蛋白表达、病毒转染。
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|
|
SeeHEK293CD01基础培养基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeHEK293CD02基础培养基(液体)
|
1L
|
无动物源，化学成分限定培养基，不含水解物和生长因子。Expi 293 做抗体瞬转。
|
|
|
SeeHEK293CD02基础培养基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeHEK293CD03基础培养基(液体)
|
1L
|
无动物源，化学成分限定培养基，不含水解物和生长因子。293F/T做病毒瞬转。
|
|
|
SeeHEK293CD03基础培养基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeHEK293FM01补料培养基(液体)
|
1L
|
液体补料A 含有60g/L 的葡萄糖（干粉不含葡萄糖），补料 B 不含葡萄糖。
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|
SeeHEK293FM01补料培养基(干粉)
|
10L、100L
|
Vero细胞化学成分限定培养基
|
货号
|
产品名称
|
规格
|
特点
|
|
SeeVero 01基础培养基(液体)
|
1L
|
无动物源，化学成分限定培养基，不含水解物和生长因子。
|
|
|
SeeVero 01基础培养基(干粉)
|
10L、100L
|
细胞的扩增
将选定的细胞株接种到培养皿或生物反应器中，提供适当的环境条件，如温度、湿度和氧气含量，促进细胞的生长和分裂。
细胞的维持和监测
定期检查和维护细胞的健康状态，包括细胞密度、细胞活力和污染情况。必要时，可以进行细胞的传代，以保持细胞的活力和稳定性。
目标产物的表达和分泌
通过调节培养条件和添加适当的诱导剂，促使细胞产生目标药物或生物制品，并将其分泌到培养基中。
IPTG（异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷）（ECJ0025D）可用于尽量增加表达载体中的基因表达。当用抗体筛选 λ 噬菌体库时，通过防止融合蛋白的表达直至建立菌斑块，可以提升成功概率。
产品信息
|
英文名
|
IPTG（ECJ0025D）
|
|
别名
|
异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷；异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖甙
|
|
分子式
|
C9H18O5S
|
|
分子量
|
238.3012
|
|
CAS
|
367-93-1
|
检测指标
|
Assay
|
98.0~101.0%
|
|
Purity（HPLC）
|
≥98.0%
|
|
Identification
|
Complies
|
|
Moisture content
|
≤1.0%
|
|
PH（5% aq.）
|
5.0~7.0
|
|
Solubility
|
Soluble in water and methanol
|
|
OD300nm
|
≤0.15（5% aq.）
|
|
OD400nm
|
≤0.06（5% aq.）
|
|
Melting point
|
110~114℃
|
|
1,4-dioxane
|
Negative
|
|
Specific rotation
|
-34.5°～-28.5°
|
|
Shape and properties
|
White crystalline powder
|
收获和纯化
当目标产物达到一定的产量后，可以收获细胞培养物，并进行后续的纯化和提纯步骤，以获得高纯度的目标药物。
产品的测试和分析
对收获的产品进行质量控制和分析，确保其符合规定的质量标准和纯度要求。
西宝生物提供细胞培养相关试剂列表
|
品牌
|
货号
|
中文名称
|
规格
|
CAS
|
用途
|
|
Seebio
|
中国仓鼠卵巢细胞；CHO-K1
|
|
|
细胞系
|
|
|
Seebio
|
中国仓鼠卵巢细胞；CHO
|
|
|
细胞系
|
|
|
Seebio
|
CHO-S 中国仓鼠卵巢细胞(悬浮）
|
|
|
细胞系
|
|
|
Seebio
|
非洲绿猴肾细胞；VEROC1008(E6)
|
|
|
细胞系
|
|
|
Seebio
|
非洲绿猴肾细胞；VERO
|
|
|
细胞系
|
|
|
Seebio
|
MDBK；牛肾细胞
|
|
|
细胞系
|
|
|
Seebio
|
人胚肾细胞；HEK-293 STR
干粉，CHO-K1培养基，不含水解物和生长因子
|
|
|
细胞系
|
|
|
Wako
|
PSFM-J1 Medium Wako, Liquid
PSFM-J1昆虫细胞培养基 |
500 mL
|
|
液体，适用于Sf9、Sf21、H5等细胞
|
|
|
Wako
|
PSFM-J2 Medium Wako, Liquid
PSFM-J2昆虫细胞培养 |
1L
|
|
液体，适用于Sf9、Sf21、H5等细胞
|
|
|
Seebio
|
SeeVero 01基础培养基(液体)
|
1L
|
|
液体，Vero细胞专用培养基
|
|
|
Seebio
|
SeeVero 01基础培养基(干粉)
|
10L,100L
|
|
干粉，Vero细胞专用培养基
|
|
|
Seebio
|
SeeBM02 CHO基础培养基(液体)
|
1L
|
|
液体，CHO-K1培养基，不含水解物和生长因子
|
|
|
Seebio
|
SeeBM02 CHO基础培养基(干粉)
|
10L,100L
|
|
||
|
Seebio
|
SeeBM03 CHO基础培养基(液体)
|
1L
|
|
液体，CHO-K1培养基，不含水解物；含有微量生长因子
|
|
|
Seebio
|
SeeBM03 CHO基础培养基(干粉)
|
10L,100L
|
|
干粉，CHO-K1培养基，不含水解物；含有微量生长因子
|
|
|
Seebio
|
优级胎牛血清
|
500ml
|
|
来源乌拉圭，FBS
|
|
|
Seebio
|
小牛血清
|
100ml, 500ml
|
|
小牛血清，BCS
|
|
|
Seebio
|
胰蛋白酶（猪胰）1：250
|
5g，50g
|
9002-07-7
|
消化粘附蛋白并将细胞释放到培养基中
|
|
|
Seebio
|
二甲基亚砜(DMSO)
|
500ml,4L
|
67-68-5
|
细胞冻存时，保护细胞
|
|
|
Seebio
|
L-谷氨酰胺(Gln)
|
50g,500g
|
56-85-9
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-赖氨酸
|
100g,500g
|
56-87-1
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-酪氨酸
|
25g,100g
|
60-18-4
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-异亮氨酸
|
100g,1kg
|
73-32-5
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-丙氨酸
|
100g,500g,1kg
|
56-41-7
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-精氨酸
|
100g,500g
|
74-79-3
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-脯氨酸
|
100g,1kg
|
147-85-3
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-亮氨酸
|
25g,100g
|
61-90-5
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-缬氨酸
|
100g,1kg
|
72-18-4
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-色氨酸
|
25g,100g,1kg
|
73-22-3
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-半胱氨酸
|
100g
|
52-90-4
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-组氨酸
|
5g,25g,100g
|
71-00-1
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
甘氨酸
|
500g,1kg,25kg
|
56-40-6
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-甲硫氨酸
|
25g,100g,500g
|
63-68-3
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-谷氨酸(Glu)
|
100g,500g
|
56-86-0
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-胱氨酸
|
5g,25g
|
56-89-3
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-丝氨酸
|
25g,100g,1kg
|
56-45-1
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-苯丙氨酸
|
100g,500g
|
63-91-2
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
L-苏氨酸
|
25g,100g
|
72-19-5
|
细胞培养添加剂
|
|
|
Seebio
|
酚红
|
25g
|
143-74-8
|
观察和监测细胞培养过程中细胞的生长和增殖情况
|
|
|
Seebio
|
异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)
|
25g,100g
|
367-93-1
|
蛋白表达诱导剂
|
|
|
Seebio
|
OED14K发酵工业专用消泡剂
|
250g，1Kg
|
|
消泡剂
|
|
|
Seebio
|
OED24K发酵工业专用消泡剂
|
250g，1Kg
|
|
消泡剂
|
西宝生物提供高品质细胞培养相关试剂，咨询服务热线：400-021-8158或021-50272975。
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