蛋白酶K / Proteinase K

来源：seebio.cn作者：西宝生物人气：-发表时间：2012-03-23 13:55:00【大中小】

蛋白酶K / Proteinase K

(Lyophilized Powder, from Tritirachium album limber)

简介
蛋白酶K是现有蛋白酶中活性高的品种，来源于林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。在pH 4～pH 12的条件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。它可切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的降解。蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，具有降解天然蛋白质的能力。

应用
u 基因诊断试剂盒
u 基因组DNA提取试剂盒
u RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶
u 提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质-譬如DNA疫苗和肝素的制备
u 制备脉冲电泳的染色体DNA
u 蛋白质印迹
u 蛋白酶K的一般工作浓度50-100ug/ml

质量指标

货号	170290
品名	蛋白酶K / Proteinase K
来源	林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）
外观	白色冻干粉
比活	>40 U/mg蛋白。
分子量	29,730
CAS No.	39450-01-6
EC No	3.4.21.14
活性单位定义	37oC、pH 7.5条件下，每分钟可水解底物酪蛋白生成1 μmol酪氨酸的蛋白酶K 的量，定义为一个单位（U）。
DNase残留	以λ DNA为底物，37oC消化6小时以上，未检测到脱氧核糖核酸酶活性。
RNase残留	25oC消化16小时以上，未检测到核糖核酸酶活性。
失活方法	反应体系中加入PMSF或DFP抑制剂即可失活，65℃温育10-15min可部分失活
包装/价格	100mg/350元，1g，10g，询价现货

储存

干粉状态可在0~4oC条件下低温保藏。溶解后分装为适当体积，-20oC贮存。运输可在室温下进行。
正确的贮存条件下，干粉状态的有效期可达一年。液体状态在-20oC有效期为半年。打开包装使用后，如果在2~8oC环境下放置超过一周时间，建议过滤除菌或增加稳定剂如0.5%叠氮化钠，防止微生物污染。

贮存和稀释缓冲液：50 mM Tris-HCL缓冲液,2mMCaCL2 (pH 8.0)。

反应条件：反应缓冲液中37-56℃温育一小时

实验数据

1. 酶活测定和稳定性试验

(1) 酶活测定

Specificity Activit of Proteinase K
Product Manufacture	国外M品牌	Seebio
Activty from lyophilized product u/mg	33.5	49.5

(2)纯度和消化蛋白测试（SDS-PAGE）

结果: 蛋白质纯度超过 99% （激光扫描 SDS-PAGE胶）

(3) 稳定性测试：

结论：冻干粉正确储存一年内活性不变；液体酶酶活半年内降低小于5%。

2. 对比试验

以Roche蛋白酶K和seebio蛋白酶K对比。
对比反应条件：roche蛋白酶k65℃10m； Seebio 蛋白酶k65℃10m； Seebio 蛋白酶K55℃60m
以下结果QC符合要求。每管均为500ul全血。共3组对照。

实验条件	得率
ROCHE65℃10m	33ug	19.2ug	5ug
SEEBIO65℃10m	30ug	20ug	4.8ug
SEEBIO55℃60m	30.4ug	18.5ug	5.4ug

结论：SEEBIO 蛋白酶K与ROCHE蛋白酶k实验结果显示在65℃水浴10m后得率及跑胶图效果基本相同。可替代使用。

全血提取DNA试剂盒电泳图

日期：2010.06.09
凝胶浓度：0.7％琼脂糖RNA胶
上样量：1ug/孔
电泳条件：U=105V T=15min
1. 090826-15（roche，65℃ 10m）
2.090826-15 （seebio，65℃ 10m）
3. 090826-15（seebio，55℃ 60m）
4.090826-17 （roche， 65℃10m）
5. 090526-17（seebio， 65℃10m）
6.090826-17 （seebio， 55℃60m）
7. 090826-20（roche， 65℃10m）
8.090826-20 （seebio， 65℃10m）
9. 090826-20（seebio， 55℃60m）

全血提取DNA actin电泳图

日期：2010.06.10
凝胶浓度：0.7％琼脂糖DNA胶
上样量：10ug/孔
电泳条件：U=95V T=15min
1. 090826-15（roche，65℃ 10m）
2.090826-15 （seebio，65℃ 10m）
3. 090826-15（seebio，55℃ 60m）
4.090826-17 （roche， 65℃10m）
5. 090526-17（seebio， 65℃10m）
6.090826-17 （seebio， 55℃60m）
7. 090826-20（roche， 65℃10m）
8.090826-20 （seebio， 65℃10m）
9. 090826-20（seebio， 55℃60m）
－：Negative control
＋：Positive Control

参考文献

1. Kraus, E; et.al. Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939; 1976.
2. Jany,KD, et al. Amino Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium album limber. Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS Letter, 199,139.1986.