His标签蛋白纯化介质(IDA)

来源：seebio.cn作者：西宝生物人气：-发表时间：2012-07-18 11:00:00【大中小】

1、概述

金属螯合层析，又称固定化金属离子亲和层析（Immobilized metal ion affinity chromatography，IMAC）。该法利用蛋白质表面的某些氨基酸（如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和金属离子（Cu²⁺、Zn²⁺、Ni²⁺等过渡金属离子）发生特殊的相互作用的原理来实现蛋白质的分离。琼脂糖亲和介质（Ni）是将金属离子Ni²⁺螯合在琼脂糖凝胶上形成的一种亲和层析介质，具有吸附容量大、选择型好、易于再生、成本低等优点，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记蛋白质的高效纯化。

2、琼脂糖亲和介质（Ni）的应用

纯化组氨酸标记的乳酸脱氢酶

层析柱：6.4 cm ×1.0 cmI.D.，CV=5 ml
样品：组氨酸标记的LDH发酵液（0.45μm滤膜过滤，上样10ml）
流速：1ml/min
平衡缓冲液（A）：20mM PB +0.1MNaCl +50mM咪唑, pH 7.4
洗脱缓冲液（B）：20mM PB +0.1MNaCl +0.5M咪唑, pH 7.4
1: 发酵液
2: 本介质的流穿峰P0
3: 本介质的洗脱峰P1
4: 进口介质的流穿峰P0
5: 进口介质的洗脱峰P1

西宝提供的琼脂糖亲和介质（Ni）从发酵液中纯化His-tag LDH（组氨酸标记的乳酸脱氢酶），并与进口介质相比较。上图为琼脂糖亲和层析介质（Ni）纯化LDH的色谱图和电泳分析图。结果显示中心生产的琼脂糖亲和层析介质（Ni）与进口同类产品的纯化效果相当。活性分析结果表明，采用本中心生产的琼脂糖亲和层析介质（Ni）纯化得到的LDH的活性回收率达到80%以上，可以实现对进口介质的替代。

3、产品与服务

西宝可提供IDA（亚氨基二乙酸）、NTA（次氨基三乙酸）和CM-ASP（羧甲基天冬氨酸）三种不同螯合配体的Ni金属螯合介质，并可根据客户需求提供螯合其它金属离子（Cu²⁺、Co²⁺、Zn²⁺、Fe³⁺等）的介质。此外，为了解决金属离子残留问题，本中心还开发了未螯合金属离子的空白胶，用于吸附去除产品中残留的金属离子。

4、规格

产品名称	镍亲和介质
配基密度	15 ~120mmol/mL
pH稳定性	3 ~ 13
粒径范围(μm)	45 ~ 165
最大流速(cm/h)	400
应用	用于含组氨酸标签蛋白的纯化
规格	50mL
	250 mL
	1 L

西宝提供的介质如下：

产品名称	琼脂糖亲和介质（镍）	琼脂糖亲和介质（谷胱甘肽）	琼脂糖亲和介质（肝素）	琼脂糖亲和介质（蓝胶）	琼脂糖亲和介质（蛋白A）
配基密度（ml介质）	15~120mmol	20~30 mmol	5 mg	7-10 μmol	6 mg
载量（ml介质）	20~30mg（LDH）	10mg GST	2mg抗凝血酶III	20mgBSA	35mgIgG（兔）
pH稳定性	3-13	3-12	4-12	4-12	2-11
粒径范围(μm)	45-165	45-165	45-165	45-165	45-165
最大流速(cm/h)	500	450	500	500	450
应用	用于含组氨酸标签蛋白的纯化	用于含GST标签蛋白的纯化	用于抗凝血酶III、凝血因子及干扰素等蛋白的纯化	用于白蛋白、干扰素、脂蛋白、凝聚因子等蛋白的纯化	用于多种抗体的纯化