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His标签蛋白纯化介质(IDA)

来源:seebio.cn作者:西宝生物人气:-发表时间:2012-07-18 11:00:00【

 

1、概述

金属螯合层析,又称固定化金属离子亲和层析(Immobilized metal ion affinity chromatographyIMAC)。该法利用蛋白质表面的某些氨基酸(如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等)和金属离子(Cu2+Zn2+Ni2+等过渡金属离子)发生特殊的相互作用的原理来实现蛋白质的分离。琼脂糖亲和介质(Ni)是将金属离子Ni2+螯合在琼脂糖凝胶上形成的一种亲和层析介质,具有吸附容量大、选择型好、易于再生、成本低等优点,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质及多肽的分离纯化,尤其是组氨酸标记蛋白质的高效纯化。

 


2
、琼脂糖亲和介质(Ni)的应用

 

纯化组氨酸标记的乳酸脱氢酶

层析柱:6.4 cm ×1.0 cmI.D.CV=5 ml
       
样品:组氨酸标记的LDH发酵液(0.45μm滤膜过滤,上样10ml
        
流速:1ml/min
      
平衡缓冲液(A):20mM PB +0.1MNaCl +50mM咪唑, pH 7.4
       
洗脱缓冲液(B):20mM PB +0.1MNaCl +0.5M咪唑, pH 7.4
        1:
发酵液
        2: 本
介质的流穿峰P0
        3:
本介质的洗脱峰P1
        4:
进口介质的流穿峰P0
        5:
进口介质的洗脱峰P1 

西宝提供的琼脂糖亲和介质(Ni)从发酵液中纯化His-tag LDH(组氨酸标记的乳酸脱氢酶),并与进口介质相比较。上图为琼脂糖亲和层析介质(Ni)纯化LDH的色谱图和电泳分析图。结果显示中心生产的琼脂糖亲和层析介质(Ni)与进口同类产品的纯化效果相当。活性分析结果表明,采用本中心生产的琼脂糖亲和层析介质(Ni)纯化得到的LDH的活性回收率达到80%以上,可以实现对进口介质的替代。


3
、产品与服务

  西宝可提供IDA(亚氨基二乙酸)、NTA(次氨基三乙酸)和CM-ASP(羧甲基天冬氨酸)三种不同螯合配体的Ni金属螯合介质,并可根据客户需求提供螯合其它金属离子(Cu2+Co2+Zn2+Fe3+等)的介质。此外,为了解决金属离子残留问题,本中心还开发了未螯合金属离子的空白胶,用于吸附去除产品中残留的金属离子。 


4
、规格

 

产品名称

镍亲和介质

配基密度

15 ~120mmol/mL

pH稳定性

3 ~ 13

粒径范围(μm)

45 ~ 165

最大流速(cm/h)

400

应用

用于含组氨酸标签蛋白的纯化

规格

50mL

250 mL

1 L


西宝提供的介质如下:

产品名称

琼脂糖亲和介质(镍)

琼脂糖亲和介质(谷胱甘肽)

琼脂糖亲和介质(肝素)

琼脂糖亲和介质(蓝胶)

琼脂糖亲和介质(蛋白A

配基密度(ml介质)

15~120mmol

20~30 mmol

5 mg

7-10 μmol

6 mg

载量(ml介质)

20~30mgLDH

10mg GST

2mg抗凝血酶III

20mgBSA

35mgIgG(兔)

pH稳定性

3-13

3-12

4-12

4-12

2-11

粒径范围(μm)

45-165

45-165

45-165

45-165

45-165

最大流速(cm/h)

500

450

500

500

450

应用

用于含组氨酸标签蛋白的纯化

用于含GST标签蛋白的纯化

用于抗凝血酶III、凝血因子及干扰素等蛋白的纯化

用于白蛋白、干扰素、脂蛋白、凝聚因子等蛋白的纯化

用于多种抗体的纯化

 

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