肝素亲和纯化介质

来源：seebio.cn作者：西宝生物人气：-发表时间：2012-07-18 11:24:00【大中小】

1、概述
琼脂糖亲和介质（肝素）主要用于分离纯化抗凝血酶III或人凝血因子，也可用于分离纯化某些生长因子（如重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组人血管内皮生长因子、重组鼠肝素辅因子II以及重组人角质细胞生长因子等）以及部分酶或蛋白（如核酸结合酶、眼镜蛇毒蛋白酶、眼镜蛇毒纤维蛋白原溶解因子以及盐源山蛭抗凝血蛋白、岩栖蝮蛇类凝血酶乳铁蛋白等）。

2、琼脂糖亲和介质（肝素）的应用

纯化转基因羊奶中的抗凝血酶III（AT-III）

层析柱：2.5 cm ×1.0 cmI.D.，CV=2 ml
样品：预处理的转基因羊奶（0.45μm滤膜过滤，上样10ml）
平衡缓冲液（A）：50mM Tris/Hcl, pH 7.2
洗脱缓冲液（B）：50mM Tris/Hcl+1MNaCl, pH 7.2
流速：1ml/min
1. 本介质的洗脱峰P1
2.本介质的洗脱峰P2
3. 进口介质的洗脱峰P1
4. 进口介质的洗脱峰P2

上图为琼脂糖亲和介质（肝素）纯化转基因羊奶中的抗凝血酶Ш的层析谱图和电泳分析图，结果显示，与同类进口介质相比，西宝提供的介质对抗凝血酶Ш具有相当的纯化效果。

纯化血浆中的抗凝血酶III

A:西宝提供的介质 B：进口介质

层析柱：2.5 cm ×1.0 cmI.D.，CV=2 ml
样品：预处理的血浆（0.45μm滤膜过滤，上样10ml）
平衡缓冲液：50mM Tris/Hcl, pH 7.2
洗脱缓冲液：50mM Tris/Hcl+1MNaCl, pH 7.2
流速：1ml/min

上图为采用琼脂糖亲和介质（肝素）和同类进口介质纯化血浆中抗凝血酶Ш的结果。如图所示，P1、P2和P3分别为穿透峰、淋洗峰和洗脱峰（目标组分）。可以看出本介质与进口介质的层析行为相似，淋洗峰和洗脱峰具有对称性好、峰窄的特点；经检测，分离出的目标组分的纯度和回收率与进口介质的结果相当。

3、规格


产品名称	肝素亲和介质
配基密度
pH稳定性	4 ~ 12
粒径范围(μm)	45 ~ 165
最大流速(cm/h)	400
应用	用于抗凝血酶III和其他含有类似氨基酸序列的蛋白的纯化
规格	50mL
	250 mL
	1 L

西宝提供的层析介质列表如下

产品名称	琼脂糖亲和介质（镍）	琼脂糖亲和介质（谷胱甘肽）	琼脂糖亲和介质（肝素）	琼脂糖亲和介质（蓝胶）	琼脂糖亲和介质（蛋白A）
配基密度（ml介质）	15~120mmol	20~30 mmol	5 mg	7-10 μmol	6 mg
载量（ml介质）	20~30mg（LDH）	10mg GST	2mg抗凝血酶III	20mgBSA	35mgIgG（兔）
pH稳定性	3-13	3-12	4-12	4-12	2-11
粒径范围(μm)	45-165	45-165	45-165	45-165	45-165
最大流速(cm/h)	500	450	500	500	450
应用	用于含组氨酸标签蛋白的纯化	用于含GST标签蛋白的纯化	用于抗凝血酶III、凝血因子及干扰素等蛋白的纯化	用于白蛋白、干扰素、脂蛋白、凝聚因子等蛋白的纯化	用于多种抗体的纯化