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肝素亲和纯化介质

来源:seebio.cn作者:西宝生物人气:-发表时间:2012-07-18 11:24:05【
1、概述
    琼脂糖亲和介质(肝素)主要用于分离纯化抗凝血酶III或人凝血因子,也可用于分离纯化某些生长因子(如重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组人血管内皮生长因子、重组鼠肝素辅因子II以及重组人角质细胞生长因子等)以及部分酶或蛋白(如核酸结合酶、眼镜蛇毒蛋白酶、眼镜蛇毒纤维蛋白原溶解因子以及盐源山蛭抗凝血蛋白、岩栖蝮蛇类凝血酶乳铁蛋白等)。  

2、琼脂糖亲和介质(肝素)的应用

纯化转基因羊奶中的抗凝血酶IIIAT-III

层析柱:2.5 cm ×1.0 cmI.D.CV=2 ml
样品:预处理的转基因羊奶(0.45μm滤膜过滤,上样10ml
平衡缓冲液(A):50mM Tris/Hcl, pH 7.2
洗脱缓冲液(B):50mM Tris/Hcl+1MNaCl, pH 7.2
流速:1ml/min
1.
本介质的洗脱峰P1
2.本
介质的洗脱峰P2
3.
进口介质的洗脱峰P1
4.
进口介质的洗脱峰P2 

      上图为琼脂糖亲和介质(肝素)纯化转基因羊奶中的抗凝血酶Ш的层析谱图和电泳分析图,结果显示,与同类进口介质相比,西宝提供的介质对抗凝血酶Ш具有相当的纯化效果。

                                                                                纯化血浆中的抗凝血酶III

                 A:西宝提供的介质                                               B:进口介质 

层析柱:2.5 cm ×1.0 cmI.D.CV=2 ml
样品:预处理的血浆(0.45μm滤膜过滤,上样10ml
平衡缓冲液:50mM Tris/Hcl, pH 7.2
洗脱缓冲液:50mM Tris/Hcl+1MNaCl, pH 7.2
流速:1ml/min

      上图为采用琼脂糖亲和介质(肝素)和同类进口介质纯化血浆中抗凝血酶Ш的结果。如图所示,P1P2P3分别为穿透峰、淋洗峰和洗脱峰(目标组分)。可以看出本介质与进口介质的层析行为相似,淋洗峰和洗脱峰具有对称性好、峰窄的特点;经检测,分离出的目标组分的纯度和回收率与进口介质的结果相当。

3、规格

 

产品名称

肝素亲和介质

配基密度

 

pH稳定性

4 ~ 12

粒径范围(μm)

45 ~ 165

最大流速(cm/h)

400

应用

用于抗凝血酶III和其他含有类似氨基酸序列的蛋白的纯化

规格

50mL

250 mL

1 L

 

 西宝提供的层析介质列表如下

产品名称

琼脂糖亲和介质(镍)

琼脂糖亲和介质(谷胱甘肽)

琼脂糖亲和介质(肝素)

琼脂糖亲和介质(蓝胶)

琼脂糖亲和介质(蛋白A

配基密度(ml介质)

15~120mmol

20~30 mmol

5 mg

7-10 μmol

6 mg

载量(ml介质)

20~30mgLDH

10mg GST

2mg抗凝血酶III

20mgBSA

35mgIgG(兔)

pH稳定性

3-13

3-12

4-12

4-12

2-11

粒径范围(μm)

45-165

45-165

45-165

45-165

45-165

最大流速(cm/h)

500

450

500

500

450

应用

用于含组氨酸标签蛋白的纯化

用于含GST标签蛋白的纯化

用于抗凝血酶III、凝血因子及干扰素等蛋白的纯化

用于白蛋白、干扰素、脂蛋白、凝聚因子等蛋白的纯化

用于多种抗体的纯化

 

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