肝素亲和纯化介质
琼脂糖亲和介质(肝素)主要用于分离纯化抗凝血酶III或人凝血因子,也可用于分离纯化某些生长因子(如重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组人血管内皮生长因子、重组鼠肝素辅因子II以及重组人角质细胞生长因子等)以及部分酶或蛋白(如核酸结合酶、眼镜蛇毒蛋白酶、眼镜蛇毒纤维蛋白原溶解因子以及盐源山蛭抗凝血蛋白、岩栖蝮蛇类凝血酶乳铁蛋白等)。
2、琼脂糖亲和介质(肝素)的应用
纯化转基因羊奶中的抗凝血酶III(AT-III)
层析柱:2.5 cm ×1.0 cmI.D.,CV=2 ml
样品:预处理的转基因羊奶(0.45μm滤膜过滤,上样10ml)
平衡缓冲液(A):50mM Tris/Hcl, pH 7.2
洗脱缓冲液(B):50mM Tris/Hcl+1MNaCl, pH 7.2
流速:1ml/min
1. 本介质的洗脱峰P1
2.本介质的洗脱峰P2
3. 进口介质的洗脱峰P1
4. 进口介质的洗脱峰P2
上图为琼脂糖亲和介质(肝素)纯化转基因羊奶中的抗凝血酶Ш的层析谱图和电泳分析图,结果显示,与同类进口介质相比,西宝提供的介质对抗凝血酶Ш具有相当的纯化效果。
纯化血浆中的抗凝血酶III
A:西宝提供的介质 B:进口介质
层析柱:2.5 cm ×1.0 cmI.D.,CV=2 ml
样品:预处理的血浆(0.45μm滤膜过滤,上样10ml)
平衡缓冲液:50mM Tris/Hcl, pH 7.2
洗脱缓冲液:50mM Tris/Hcl+1MNaCl, pH 7.2
流速:1ml/min
上图为采用琼脂糖亲和介质(肝素)和同类进口介质纯化血浆中抗凝血酶Ш的结果。如图所示,P1、P2和P3分别为穿透峰、淋洗峰和洗脱峰(目标组分)。可以看出本介质与进口介质的层析行为相似,淋洗峰和洗脱峰具有对称性好、峰窄的特点;经检测,分离出的目标组分的纯度和回收率与进口介质的结果相当。
3、规格
|
|
产品名称 |
肝素亲和介质 |
配基密度 |
|
pH稳定性 |
4 ~ 12 |
粒径范围(μm) |
45 ~ 165 |
最大流速(cm/h) |
400 |
应用 |
用于抗凝血酶III和其他含有类似氨基酸序列的蛋白的纯化 |
规格 |
50mL |
250 mL |
|
1 L |
西宝提供的层析介质列表如下
产品名称 |
|||||
配基密度(ml介质) |
15~120mmol |
20~30 mmol |
5 mg |
7-10 μmol |
6 mg |
载量(ml介质) |
20~30mg(LDH) |
10mg GST |
2mg抗凝血酶III |
20mgBSA |
35mgIgG(兔) |
pH稳定性 |
3-13 |
3-12 |
4-12 |
4-12 |
2-11 |
粒径范围(μm) |
45-165 |
45-165 |
45-165 |
45-165 |
45-165 |
最大流速(cm/h) |
500 |
450 |
500 |
500 |
450 |
应用 |
用于含组氨酸标签蛋白的纯化 |
用于含GST标签蛋白的纯化 |
用于抗凝血酶III、凝血因子及干扰素等蛋白的纯化 |
用于白蛋白、干扰素、脂蛋白、凝聚因子等蛋白的纯化 |
用于多种抗体的纯化 |
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