当前位置：首页 » 资讯中心 » 生命科学

荧光标记 rBC2LCN（AiLecS1）

来源：作者：人气：-发表时间：2025-09-16 10:45:00【大中小】

未分化人ES/iPS细胞检测试剂

仅需添加培养液便可检出人ES/iPS细胞！

荧光标记 rBC2LCN（AiLecS1）

◆rBC2LCN（AiLecS1）

rBC2LCN（AiLecS1）是在伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cenocepacia）来源凝集素 BC2L-C 的 N末端域表达的重组凝集素。

由于 rBC2LCN 对存在于人ES/iPS细胞表面的足糖萼蛋白（Podocalyxin）上的粘蛋白样O-型糖链的H型3（Fucα1-2Galβ1-3GalNAc）具有高亲和力，因此可用作人 ES/iPS 细胞的未分化标志物。

本产品是荧光染色标记，能直接添加到人 ES/iPS 细胞的培养液中，实现未分化活细胞分析。适用于未分化细胞检测用标记。可用于细胞染色，流式细胞仪。另外，使用本品持续培养数日已确认细胞无毒性。

我们供应绿色荧光标记（FITC），黄色荧光标记（Cy3），红色荧光标记（Cy5）的三种类型的系列商品。

◆特点

●　添加到培养基即可进行染色

●　无需固定细胞，活细胞也可直接进行明显染色

●　细胞毒性低，染色后也可培养

●　识别 Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-3, SSEA-4 细胞表面存在的糖链

●　可用于细胞染色和流式细胞仪

◆产品概述

●　已进行无菌试验（0.1 μm 过滤器进行灭菌）

●　PBS(-) 溶液

●　使用时稀释比

　 Live Cell Imaging 1：100～1,000

　 Flow Cytometry 1：100～1,000

●　激发波长/发射波长

	Excitation	Emission
rBC2LCN-FITC	495 nm	520 nm
rBC2LCN-547	551 nm	565 nm
rBC2LCN-635	634 nm	654 nm

◆使用方法

细胞染色

活细胞染色（Live Cell Imaging）

1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞

2. 每 1 mL 的培养基添加 1~10 μL 的荧光标记 rBC2LCN

3. 37℃，5％CO₂孵育 30 分钟。

4. 更换新的培养基或者 HBSS(+)。

5. 利用荧光显微镜观察

固定细胞染色

1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞

2. 除去培养基，用 HBSS(+) 洗净。

3. 添加 4%多聚甲醛（PFA）溶液，室温静置 10～20 分钟。

4. 除去 PFA 后，用 D-PBS(-) 洗净三次。

5. 添加 D-PBS(-)。

6. 每 1 mL 的 D-PBS(-) 添加 1～10 μL 荧光标记 rBC2LCN。

7. 37℃，5% CO₂孵育 30 分钟。

8. 更换 D-PBS(-)。

9. 利用荧光显微镜观察。

流式细胞仪

1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞。

2. 使用细胞分散液，分散成单细胞。

3. 将细胞分散液移至管内，1,000 rpm 离心 3 分钟。

4. 除去上清液，用 FCM Buffer* 重悬细胞，离心后，舍弃上清液。

* FCM Buffer： D-PBS(-)和HBSS(-)含有 10 mmol/L EDTA，1% BSA

5. 用 FCM Buffer 重悬出 5×10⁶cells/mL 的细胞悬浮液

6. 每 1 mL 细胞悬浮液，添加 1～10 μL 的荧光标记 rBC2LCN。

7. 室温，避光静置30分钟。

8. 1,000 rpm 离心三分钟，除去上清液。

9. 用 FCM Buffer 重悬细胞，离心后，除去上清液。

10. 适量的 FCM Buffer 再悬浮细胞。

11. 进行流式细胞术。

使用注意

1. rBC2LCN 染色可以维持 2~3天。

2. 使用含有血清的培养基可能使信号背景变高

3. 根据流式细胞仪进行细胞分选时，当细胞分散或 FCM 缓冲液的终浓度到达 10 μmol/L 时，请添加 Y-27632。

◆人iPS细胞的活细胞染色（Live Cell Imaging）

●　用 rBC2LCN-FITC， rBC2LCN-635 以及 Hoechst33342 对人 iPS 细胞 201B7 株进行染色处理。（无细胞固定）

（稀释倍数　1：1,000）

●　用 rBC2LCN-FITC、Tra-1-60、Tra-1-81、SSEA-4 对人 iPS 细胞 201B7 株进行染色处理。

　 2小时后确认染色图像。（未固定细胞）

（稀释倍数　1：100）

★　与 Tra-1-60、Tra-1-81 相比较，rBC2LCN 的活细胞染色度更强。

★　即使交换培养基，rBC2LCN 染色第二天后染色效果依然明显。

◆人ES细胞的活细胞染色（Live Cell Imaging）

使用 rBC2LCN-FITC 对人 ES 细胞 WA01 株进行染色（未细胞固定）。细胞的一部分无法维持未分化状态而进行分化。如果使用 rBC2LCN-FITC 对活细胞进行染色，以维持未分化状态部分已染色，而已分化部分未染色来进行区分。

＜数据提供国家研究与发展公司先进工业科学和技术研究院新药开发的基础研究部门恭子小沼老师，伊藤弦老师＞

◆人 iPS 细胞固定后染色

将人 iPS 细胞 201B7 株用多聚甲醛固定后，使用 rBC2LCN 和 DAPI 进行细胞染色。

对于人 iPS 细胞毒性评估

向人 iPS 细胞 201B7 株的培养液中分别添加其 1/1,000、1/100、1/50 量的 rBC2LCN-FITC，持续培养。其结果是，不存在 rBC2LCN-FITC 浓度对毒性影响，不同浓度的细胞增殖程度相同程度。

〔细胞株〕
人iPS细胞 201B7株

〔培养基组成〕
StemSure^®hPSC培养基Δ+35 ng/mL bFGF

〔涂层〕
Matrigel^® hESC-Qualified Matrix

〔细胞接种数目〕
4×10⁴cells/well（12孔板）

使用Flow Cytometry进行人iPS细胞分离

使用rBC2LCN-FITC及rBC2LCN-6547、rBC2LCN-635对人iPS细胞201B7细胞株和人正常二倍体成纤维细胞染色，进行流式细胞术。

实验结果：未分化的人iPS细胞与分化的人二倍体成纤维细胞成功分离。

◆产品列表

产品编号	产品名称	等级	容　量
180-02991 186-02993	人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC) rBC2LCN-FITC 【AiLecS1-FITC】 Ex. 495nm, Em. 520nm	用于细胞染色	100 μL 100 μL×5
186-03211 182-03213	人iPS未分化标记染料rBC2LCN-547 (AiLecS1-547) rBC2LCN-547 【AiLecS1-547】 Ex. 551nm, Em. 565nm	用于细胞染色	100 μL 100 μL×5
185-03161 181-03163	人iPS未分化标记染料rBC2LCN-635 (AiLecS1-635)　 rBC2LCN-635 【AiLecS1-635】 Ex. 634nm, Em. 654nm	用于细胞染色	100 μL 100 μL×5