D-二聚体（D-Dimer）-磁微粒化学法学发光（AP/AE） /荧光免疫层析解决方案

来源：作者：人气：-发表时间：2024-04-08 08:53:00【大中小】

1.项目背景

1.1 D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子ⅩⅢ交联后，经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，能够反映体内的凝血功能和纤溶活性，是机体高凝状态、血栓形成、继发性纤溶亢进的指标。在深静脉血栓、肺栓塞、弥散性血管内凝血、重症肝炎等疾病中水平升高，以及溶栓治疗后均可见D-二聚体水平升高，可作为溶栓治疗的有效观察指标。由于具有极高的敏感性和阴性预测值，临床上已经将D-二聚体阴性作为排除肺栓塞（pulmonary embolism，PE）、深静脉血栓（deep venous thrombosis，DVT）形成的重要依据。

1.2 目前D-二聚体检测方法众多，主要有酶联免疫吸附（ELISA）、酶联免疫荧光（ELFA）、非增强胶乳凝集试验、胶乳增强免疫比浊法、化学发光法、免疫层析（POCT）等。这些方法在检测方便性、检测时长、检测敏感性、结果报告（定性/半定量/定量）等方面各有不同。由于针对 D-二聚体D-结构域单克隆抗体的引入，使得检测特异性和敏感性获得了显著的提高，但不同检测方法间结果差异可达几十倍，特别是检测敏感性（阴性排除价值），大多数未获得验证或权威机构认可。

1.3 在2022年《急诊胸痛心血管标志物联合检测专家共识》中，推荐意见 12 ：基于D-二聚体检测缺乏国际认证的内部对照或校准品，不同实验室结果不具可比性，建议在动态监测时采用同一方法。【推荐级别：强推荐】

2.性能表现

针对D-二聚体的检测，西宝生物推出2种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下。

2.1化学发光（AP）平台：

2.1.1组合1：D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）标记碱性磷酸酶；

线性范围：0.05mg/L-40mg/L；最低检出限：0.05mg/L；

浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

2.1.2组合2：D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）标记碱性磷酸酶；

线性范围：0.05mg/L-40mg/L；最低检出限：0.05mg/L；

浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

2.2化学发光（AE）平台：

2.2.1组合3：D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）标记吖啶酯；

线性范围：0.05mg/L-40mg/L；最低检出限：0.05mg/L；

浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

2.2.2组合4：D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）标记吖啶酯；

线性范围：0.05mg/L-40mg/L；最低检出限：0.05mg/L；

浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

2.3荧光免疫层析（镧系元素Eu螯合物填充）平台：

组合5：D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）标记荧光微球+D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）划膜；

线性范围：0.1mg/L-15mg/L。

浓度值在660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

3. 临床相关性

3.1 化学发光（AP）平台：

3.1.1 组合1

西宝DD抗体配对组合1（＜4mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;

西宝DD抗体配对组合1（＜40mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2＞0.95。

3.1.2 组合2

西宝DD抗体配对组合2（＜4mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.94左右;

西宝DD抗体配对组合2（＜40mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2大于0.95。

3.2化学发光（AE）平台：

3.2.1 组合3

西宝DD抗体配对组合3（＜4mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2＞0.95;

西宝DD抗体配对组合3（＜40mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2＞0.95。

3.2.2 组合4

西宝DD抗体配对组合4（＜4mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;

西宝DD抗体配对组合4（＜40mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2＞0.95。

3.3荧光免疫层析（镧系元素Eu螯合物填充）平台：

西宝DD抗体配对组合5（＜4mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;

西宝DD抗体配对组合5（＜15mg/L）的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2＞0.95。

4. 测试方案

4.1化学发光（AP）平台：

4.1.1 组合1

待测抗原: D-二聚体（D-Dimer）抗原（货号：EKN0230D）,样本/标准品（需要预稀释）:加样量20ul；

试剂1：D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步： 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入底物，进行测试。

4.1.2 组合2

待测抗原: D-二聚体（D-Dimer）抗原（货号：EKN0230D）,样本/标准品（需要预稀释）:加样量20ul；

试剂1： D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2： D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步： 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入底物，进行测试。

测试使用发光仪器: 迎凯Shine i2900。

4.2化学发光（AE）平台：

4.2.1 组合3

待测抗原: D-二聚体（D-Dimer）抗原（货号：EKN0230D）,样本/标准品（需要预稀释）:加样量20ul；

试剂1： D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2： D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步： 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入预激发液及激发液，进行测试。

4.2.2 组合4

待测抗原: D-二聚体（D-Dimer）抗原（货号：EKN0230D）,样本/标准品（需要预稀释）:加样量20ul；

试剂1： D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2： D-二聚体（D-Dimer）单克隆抗体（货号：EKY0088M）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步： 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步： 加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器: 科斯迈SMART 500S。

4.3荧光免疫层析（镧系元素Eu螯合物填充）平台组合5：

待测抗原：D-二聚体（D-Dimer）抗原（货号：EKN0230D）,样本/标准品:加样量5ul；

反应条件： 样本+荧光液混匀，上样，反应时间（10min-15min）；

测试使用荧光仪器: 和迈FIC-S100；

5.产品信息

产品名称	货号	推荐配对
D-二聚体（D-Dimer）抗体	EKY0088M	D-二聚体抗体（货号：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚体抗体（货号：EKY0088N）标记碱性磷酸酶（发光配对组合1） D-二聚体抗体（货号：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚体抗体（货号：EKY0088M）标记碱性磷酸酶（发光配对组合2） D-二聚体抗体（货号：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚体抗体（货号：EKY0088N）标记吖啶酯（发光配对组合3） D-二聚体抗体（货号：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚体抗体（货号：EKY0088M）标记吖啶酯（发光配对组合4） D-二聚体抗体（货号：EKY0088N）标记荧光微球+D-二聚体抗体（货号：EKY0088M）划膜（荧光配对组合）
D-二聚体（D-Dimer）抗体	EKY0088N
D-二聚体（D-Dimer）抗原（天然）	EKN0230D	校准、质控
D-二聚体（D-Dimer）抗体（货号：EKY0088M）-羧基磁珠浓缩液	DKY1330A
D-二聚体（D-Dimer）抗体（货号：EKY0088N）-羧基磁珠浓缩液	DKY1330B
D-二聚体（D-Dimer）抗体（货号：EKY0088M）-碱性磷酸酶浓缩液	DKY1330C
D-二聚体（D-Dimer）抗体（货号：EKY0088N）-碱性磷酸酶浓缩液	DKY1330D
D-二聚体（D-Dimer）抗体（货号：EKY0088M）-吖啶酯浓缩液	DKY1330E
D-二聚体（D-Dimer）抗体（货号：EKY0088N）-吖啶酯浓缩液	DKY1330F
D-二聚体（D-Dimer）抗体（货号：EKY0088N）标记荧光微球浓缩液	DKY1330G
AMPPD 发光底物液（即用型）	DCD0517A
AMPPD 发光底物液（即用型）	DCD0517B-
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
时间分辨荧光微球，羧基（200nm）	AEG0786B