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胃泌素17(G-17)-磁微粒化学发光法(AE/AP) /荧光免疫层析解决方案(含保护剂评估)

来源:作者:人气:-发表时间:2024-11-08 16:06:00【
1.项目背景
胃泌素(Gastrin)是一种主要由胃窦和十二指肠的G细胞分泌的胃肠激素,对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用。人体中95%以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素,主要含两种异构体G-17和G-34,其中80%~90%是由17个氨基酸残基所组成的G-17。G-17仅由胃窦部G细胞分泌,因此G-17是反映胃黏膜损伤情况的重要指标。以G-17作为核心指标的人体血清胃功能检测,属于一项无创、无痛且安全、经济的人体胃病检测方法。这种检测项目可以有效地减少胃癌患病风险,大幅度地提高胃癌疾病的早诊以及早治概率,对于各种胃病的预防和治疗都具有重要的积极意义。
《中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见(2014年)》:联合检测血清G-17、PG I、PG I/PGII比值及Hp抗体,以增加评估胃黏膜萎缩范围及程度的准确性。
《中国慢性胃炎共识意见2017年》明确血清胃蛋白酶原(PGI、PGII)以及G-17的检测有助于判断有无胃黏膜萎缩及其程度。
《中国早期胃癌筛查指南》(2017年):胃功能三项检查结合内镜精查可以提高对胃癌的诊断率。
《慢性胃炎基层诊疗指南(实践版2019)》进一步明确血清胃蛋白酶原(PGI、PGII)以及G-17检测有助于慢性萎缩性胃炎的诊断。PGI、PGI/PGII比值降低,血清G-17水平升高,提示胃体萎缩为主;若PGI及PGI/PGII比值正常,血清G-17水平降低,提示胃窦萎缩为主;全胃萎缩者,PG及G-17均降低。
2. 性能表现
针对胃泌素17(G-17)的检测,西宝生物推出4种单克隆抗体和1种抗原,适合化学发光(AE/AP)和荧光层析平台。具体性能如下
(以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证,建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证)。
2.1化学发光(AE)平台:
组合1(两试剂模式):
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B)包被羧基磁珠+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记吖啶酯;
线性范围:0.5pmol/L-500pmol/L;最低检出限:0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
组合2(三试剂模式):
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B)标记生物素+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A);
线性范围:0.5pmol/L-500pmol/L;最低检出限:0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.2化学发光(AP)平台:
组合3(两试剂模式):
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B)包被羧基磁珠+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记碱性磷酸酶;
线性范围:0.5pmol/L-500pmol/L;最低检出限:0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.3荧光免疫层析平台:
组合4:
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901C)标记荧光微球+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902C)划膜;
线性范围:0.5pmol/L-100pmol/L;最低检出限:0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
组合5:
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902C)标记荧光微球+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901C)划膜;
线性范围:0.5pmol/L-100pmol/L;最低检出限:0.5pmol/L。
浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.4 稳定性评估
2.4.1 吖啶酯标记抗体及磁珠包被抗体稳定性
采用胃泌素17(G-17) AE发光稀释液(货号:DCD0523A)将胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B)包被羧基磁珠浓缩液、胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记吖啶酯浓缩液稀释成磁珠工作液及吖啶酯工作液,进行37℃热稳定性实验。如表1所示:
a. G-17吖啶酯工作液、磁珠工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±5%以内,表明G-17吖啶酯工作液及磁珠工作液热稳定性良好;
b. G-17吖啶酯工作液+磁珠工作液联合37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化也在±5%以内,表明G-17试剂热稳定性良好。
表1 G-17磁珠及吖啶酯工作液稳定性7天数据
序号
G-17抗原稀释浓度pmol/L
G-17 吖啶酯工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
G-17 磁珠工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
G-17 吖啶酯工作液+磁珠工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
S0
0
4.9%
-5.9%
6.2%
S1
0.5
6.0%
-5.0%
1.8%
S2
1
0.2%
-0.1%
-5.0%
S3
5
-0.3%
2.5%
5.5%
S4
25
4.7%
-1.4%
5.6%
S5
100
5.6%
1.9%
5.6%
S6
500
4.5%
2.1%
1.6%
S7
1000
3.9%
0.4%
0.5%
平均变化
3.7%
-0.7%
2.7%
2.4.2 碱性磷酸酶标记抗体稳定性
A)胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记碱性磷酸酶浓缩液采用AP酶标记物稀释液(货号:DCD0519A)稀释到合适浓度后,进行37℃热稳定性实验。如表1所示,G-17 ALP酶工作液37℃储存热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过30%以上,表明G-17 ALP酶工作液热稳定性差。
表2 G-17 ALP酶工作液热稳定性3天数据(不含保护剂)
序号
G-17抗原稀释浓度pmol/L
G-17 ALP酶工作液37℃热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值均值差异
S0
0
-10.8%
S1
0.5
-31.1%
S2
1
-41.1%
S3
5
-38.2%
S4
25
-33.3%
S5
100
-34.7%
S6
500
-25.8%
S7
1000
-27.0%
平均变化
-30.3%
B)在AP酶标记物稀释液(货号:DCD0519A)中添加20%左右的蛋白保护剂GH(货号:DCL0009A)配成新的AP酶稀释液,继续进行胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记碱性磷酸酶的37℃热稳定性实验。如表2所示,G-17 ALP酶工作液37℃储存热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在±5%左右,表明G-17 ALP酶工作液热稳定性良好。本实验表明蛋白保护剂GH(货号:DCL0009A)对G-17 ALP酶工作液的稳定性有很大帮助
表3 G-17 ALP酶工作液热稳定性7天数据(含保护剂)
序号
G-17抗原稀释浓度pmol/L
G-17 ALP酶工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
S0
0
1.8%
S1
0.5
-4.3%
S2
1
-1.5%
S3
5
-3.8%
S4
25
-6.1%
S5
100
-2.3%
S6
500
-3.0%
S7
1000
-3.0%
平均变化
-2.8%
2.4.3 G-17抗原稳定性
采用G-17抗原稀释液(货号:DCD0522A)将G-17抗原(货号:EDD0791A)稀释成7个梯度(液体型),进行37℃热稳定性实验。如表4所示:
c. G-17抗原稀释梯度(液体型)2℃-8℃储存7天与-20℃储存7天发光值平均降幅在5%以内,表明G-17抗原稀释梯度(液体型)2℃-8℃储存稳定性良好;
d. G-17抗原稀释梯度(液体型)37℃热加速7天与-20℃储存7天发光值平均降幅超5%以内,表明G-17抗原稀释梯度(液体型)热稳定性良好。
表4 G-17抗原稀释梯度(液体型)稳定性7天数据
序号
G-17抗原稀释浓度pmol/L
G-17 抗原稀释梯度(液体型)2-8℃热加速7天与-20℃储存7天发光值均值差异
G-17 抗原稀释梯度(液体型)37℃热加速7天与-20℃储存7天发光值均值差异
S0
0
3.3%
6.0%
S1
0.5
3.5%
-8.3%
S2
1
-3.4%
0.4%
S3
5
1.3%
-7.1%
S4
25
0.7%
-9.4%
S5
100
0.2%
-2.7%
S6
500
2.0%
1.4%
S7
1000
-3.1%
0.5%
平均变化
0.6%
-2.4%
3.临床相关性
3.1化学发光(AE)平台:
西宝生物发光(AE)平台G-17抗体配对组合1(两试剂模式)与亚辉龙G-17试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R²>0.95,相关性良好;
西宝生物发光(AE)平台G-17抗体配对组合2(三试剂模式)与亚辉龙G-17试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R²>0.95,相关性良好。
3.2化学发光(AP)平台:
西宝生物发光(AP)平台G-17抗体配对组合3(两试剂模式)与亚辉龙G-17试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R²>0.95,相关性良好;
3.3荧光免疫层析平台:
西宝生物荧光平台G-17抗体配对组合4与亚辉龙G-17试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R²>0.95,相关性良好;
西宝生物荧光平台G-17抗体配对组合5与亚辉龙G-17试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R²>0.95,相关性良好;
4. 测试方案
4.1化学发光(AE)平台
4.1.1抗体配对组合1(两试剂模式):
待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原(货号:EDD0791A)
样本/校准品:样品加样量20ul;
试剂1:胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步:加入预激发液及激发液,进行测试。
4.1.2抗体配对组合2(三试剂模式):
待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原(货号:EDD0791A)
样本/校准品:样品加样量20ul;
M试剂:链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)稀释物,用量50ul/测试;
试剂1:胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B标记-生物素稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min;
第二步:加入50ul M试剂混合,37℃孵育5min,清洗;
第三步:加入预激发液及激发液,进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.2 化学发光(AP)平台
抗体配对组合3(两试剂模式):
待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原(货号:EDD0791A)
样本/校准品:样品加样量20ul;
试剂1:胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B标记-碱性磷酸酶稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步:加入底物,进行测试。
测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。
4.3 荧光免疫层析平台抗体配对组合4及组合5:
待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原(货号:EDD0791A)
反应条件:
样品+稀释液混匀(本次按照1:2稀释),上样,反应时间(10min-15min);
测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。
5.产品信息
产品名称
货号
推荐配对
AE发光稀释液
DCD0523A
/
AP酶标记物稀释液
DCD0519A
/
蛋白保护剂GH
DCL0009A
推荐使用浓度20%左右
胃泌素17(G-17)抗原稀释液
DCD0522A
/
胃泌素17(G-17)抗体
EKY0901B
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B)包被羧基磁珠+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记吖啶酯(配对组合1)
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B)标记生物素+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)(配对组合2)
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B)包被羧基磁珠+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记碱性磷酸酶(配对组合3)
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901C)标记荧光微球+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902C)划膜(配对组合4)
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902C)标记荧光微球+胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901C)划膜(配对组合5)
胃泌素17(G-17)抗体
EKY0902B
胃泌素17(G-17)抗体
EKY0901C
胃泌素17(G-17)抗体
EKY0902C
胃泌素17(G-17)重组抗原
EDD0791A
 
胃泌素17(G-17)抗体
(货号:EKY0901B)包被羧基磁珠浓缩液
DKY1336A
 
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901B)标记生物素浓缩液
DKY1336B
 
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记吖啶酯浓缩液
DKY1336C
 
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902B)标记碱性磷酸酶浓缩液
DKY1336D
 
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0901C)标记荧光微球浓缩液
DKY1336E
 
胃泌素17(G-17)抗体(货号:EKY0902C)标记荧光微球浓缩液
DKY1336F
 
AMPPD 发光底物液(即用型)
DCD0517A
 
AMPPD 发光底物液(即用型)
DCD0517B
 
羧基磁性微球,1.5um
DEG0800C
 
链霉亲和素磁性微球,1.5um
DEG0814A-10ml
 
时间分辨荧光微球,羧基(200nm)
AEG0786B
 

 

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