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GenomONE(R) 仙台病毒包膜细胞融合试剂 - GenomONE(R) -CF EX

来源：作者：人气：-发表时间：2024-02-18 09:16:00【大中小】

GenomONE^® 仙台病毒包膜细胞融合试剂

GenomONE^® -CF EX

GenomONE^®-CF EX 含有仙台病毒包膜和专用缓冲液，可促使细胞融合。

适用于贴壁/悬浮状态的所有细胞，仅需 30 min，即可制备融合细胞和杂交瘤。

◆ 用途

● 制备杂交瘤

●　应用于癌细胞与树状细胞融合的癌症免疫研究

●　应用于内脏来源细胞与干细胞融合的再生医疗研究

●　应用于去核未受精卵的核移植等的发育、繁殖和育种研究

●　替代电融合法、PEG 法

◆ HVJ Envelope（HVJ-E）：

HVJ 包膜（HVJ-E）是完全灭活和纯化仙台病毒（HVJ*），即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合，通过Ｆ蛋白的作用，引起细胞膜融合。在 HVJ-E 中，仙台病毒的基因组 RNA 已经完全失活，在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和设备，它可以安全地在普通的实验室使用。

*HVJ：日本仙台病毒

◆ HVJ-E 细胞融合原理

在低温（0 - 8℃)条件下，每一个细胞与数百个以上的 HVJ - E 接触，HVJ - E 与细胞膜上的唾液酸受体结合，通过细胞表面吸附（步骤１），细胞通过 HVJ-E 相互连接（步骤２），形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/HVJ-E 的复合物加热到 37℃ 时，细胞膜干扰就会进一步扩大，细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的，随后会立即返回到正常结构，但是在这个期间，细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合（步骤３）。

步骤一	步骤二	步骤三

◆ 应用方法

悬浮法	电融合法

◆ 悬浮细胞融合案例

同种细胞融合

异种细胞融合

荧光标记的红（* 1）细胞和绿色荧光标记（* 2）细胞（每1.0×10⁵个）在融合缓冲液 50 μL 混合后，加入 HVJ-E 冰敷５分钟，随后 37℃ 下反应 15 分钟后，融合细胞（黄色）进行了观察。

◆ 黏着态和悬浮态细胞融合案例

在粘合状态BHK-21（红）和在浮动状态（绿色）的P19细胞的融合

胶粘状态的HeLa S3（红）在浮动状态（绿色）的P19细胞的融合

荧光标记的（* 1）中的红，附着的细胞在 12 孔平板，绿色荧光标记（* 2）中，添加预先准备的 HVJ-E，来处理漂浮细胞１×10⁵个的悬浮液（融合缓冲污染），并在室温下离心（1000转），每个板５分钟。随后孵育37℃15分钟后，更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察３个小时后的融合细胞（黄色）。

◆ 和 PEG 法的比较

红色荧光标志(* 1）的 ratMSC（骨髓由来老鼠间叶系细胞）和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞２×10⁵个融合缓冲液 50 μL 中混合后，添加 HVJ – E，冰浴５分钟，然后 37℃ 孵育反应15分钟，观察融合细胞（黄色）。１-２日培养后，观察到粘着的融合细胞。在 PEG 法中融合紧接之后细胞毒性强烈，融合细胞的数量很少。

◆安全性说明

HVJ-E 失活的确认（确认无感染性病毒的存在）

1.	细胞增值实验（荧光灶单元（FFU）法）处理 LLC-MK2 细胞，一到两天后，病毒生长性的 HVJ 融合蛋白F抗体通过荧光抗体法测定，已证实未检测到病毒蛋白。<制造阶段实验>
2.	受精卵生长试验（血凝单位测定）处理受精卵，３天后的病毒增殖，包括在 HVJ 表面的 HN 蛋白的红血细胞聚合活性（HAU）测量作为指标，已经证实，没有看到病毒的生长。<制造阶段实验>
3.	小鼠感染性研究鼻腔给药小鼠和未处理小鼠（SIX周）在相同笼中饲养，通过测定血清中的抗 HVJ 抗体滴度进行了个体之间感染性的检测。其结果是，在非给药的情况下未观察到抗体滴度增加，表明未感染 HVJ-E。
4.	动物个体的遗传基因导入实验小鼠、大鼠等实验动物的各种药物实验（肺、气管、肝和静脉等）。已证实完全没有病毒感染或是可疑的事例。

产品编号	产品名称	产品规格
388-18721	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙台病毒包膜（1只装）细胞融合试剂	1 set
384-18723	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙台病毒包膜（1只装）细胞融合试剂	4 sets
382-18724	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙台病毒包膜（1只装）细胞融合试剂	16 sets