氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）-磁微粒化学法学发光（吖啶酯）/荧光免疫层析解决方案

来源：作者：人气：-发表时间：2023-06-26 09:25:00【大中小】

1.项目背景

摘自《脑利钠肽/氨基末端脑利钠肽前体检测试剂注册技术审查指导原则》

脑利钠肽（BNP）是一种与心房钠尿肽（ANP）功能类似的神经激素类物质，具有促尿排钠并抵制交感神经活性的作用，与心房钠尿肽组织在学分布及氨基酸组成等方面却存在着较大差异，故被作为另一种物质，命名为BNP。

一系列研究发现：人体内的 BNP 是由 BNP 氨基酸前体蛋白（proBNP）的 C 端裂解得到，而其N端则裂解形成仅有76个氨基酸的NT-proBNP即氨基末端脑利钠肽前体。

BNP及NT-proBNP的基因差异很大，主要表现在两者在体内的清除途径、半衰期等存在明显的差异。

BNP及NT-proBNP在体内主要通过肝肾清除。BNP的消除主要通过三种方式：一是与利钠肽受体C在受体介导下相互结合后被清除；二是被中性肽链内切酶切割而清除；三是通过被动排泄被体内的肾脏排泄清除。而相对于BNP来说NT-proBNP 在体内并无上述前两种主动清除机制，仅能被限制在高血流量的器官内，通过肾小球滤过的形式被动清除，因此在体内存留时间更长，更易于检测。

BNP及NT-proBNP 生物活性也不同。BNP 因具有一个特征性的氨基酸环，具有重要的生物活性，但在体内的半衰期较短，仅有18—22分钟；而 NT-proBNP 为直线形结构，无生物活性，在体内半衰期较长，约120分钟，且存在量不受体位及日常活动等因素的影响，含量稳定。

由于BNP和NT-proBNP 主要是由左心室心肌细胞合成，在体内等摩尔数产生后分泌进入血液，两者都可以作为一种有效的心衰标志物，可单独地预示心室压力增高状况，对于充血性心力衰竭及其引发的呼吸困难并发症，原发性高血压及其评价左心室功能障碍等心血管相关疾病的辅助诊断及治疗评估监测具有重要价值。

2.性能表现

2.1 化学发光（吖啶酯）平台：

2.1.1 组合1：氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被（货号：EKY0090L-1mg）包被羧基磁珠+氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记（货号：EKY0090M-1mg）标记吖啶酯；

a. 线性范围10pg/ml-35000pg/ml；

b. 试剂37℃热加速7天稳定性：发光值变化在±13%左右；

c. 企业工作校准品（液态）37℃热加速7天稳定性：发光值变化在±15%左右。

2.1.2 组合2：氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被（货号：EKY0090P-1mg）包被羧基磁珠+氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记（货号：EKY0090Q-1mg）标记吖啶酯；

a.线性范围10pg/ml-35000pg/ml；

2.2 组合：氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记（货号：DKY0090N-1mg）标记荧光微球+氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被（货号：DKY0090O-1mg）划膜；

线性范围：50pg/ml-35000pg/ml。

3. 临床相关性

3.1 化学发光（吖啶酯）平台：

与R品牌NT-proBNP试剂临床相关性R²>0.96

低值部分（≤800pg/mL）与R品牌NT-proBNP试剂相关性R²>0.97。

3.2 荧光免疫层析（镧系元素Eu螯合物填充）平台：

高值部分与R品牌 NT-proBNP试剂临床相关性R²>0.94；

低值部分（≤2500pg/ml）与R品牌 NT-proBNP试剂相关性R²>0.94。

4. 测试方案

4.1.1 化学发光（吖啶酯）平台：

4.1.1组合1

待测抗原:NT-proBNP抗原（货号：EKY0089E）,样本/标准品:加样量20ul；

试剂1：氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被（货号：EKY0090L-1mg）-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记（货号：EKY0090M-1mg）-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

4.1.2组合2

待测抗原:NT-proBNP抗原（货号：EKY0089F）,样本/标准品:加样量20ul；

试剂1：氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被（货号：EKY0090P-1mg）-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记（货号：EKY0090Q-1mg）-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：孵育温度37℃，样本+试剂1+试剂2（10min）；

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S；可使用于各类吖啶酯体系的化学发光仪器（如四川迈克、深圳亚辉龙、山东康华生物、基蛋生物、南京诺尔曼等）

4.2 荧光免疫层析（镧系元素Eu螯合物填充）平台：

待测抗原:NT-proBNP抗原（货号：EKY0089E/EKY0089F）,加样量10ul

反应条件：样本+荧光液混匀，上样，反应时间（10min-15min）；

测试使用荧光仪器:和迈 FIC-S100；可适用于各类荧光体系（激发波长365nm，发射波长615nm）的仪器（如广州蓝勃等）

5.产品信息

产品名称	货号	推荐配对
氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被	EKY0090L-1mg	氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被（货号：EKY0090L-1mg）包被羧基磁珠+氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记（货号：EKY0090M-1mg）标记吖啶酯（发光配对组合1）
氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记	EKY0090M-1mg
氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被	EKY0090P-1mg	氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被（货号：EKY0090P-1mg）包被羧基磁珠+氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记（货号：EKY0090Q-1mg）标记吖啶酯（发光配对组合2）
氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记	EKY0090Q-1mg
氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被	DKY0090O-1mg	氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记（货号：DKY0090N-1mg）标记荧光微球+ 氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）包被（货号：DKY0090O-1mg）划膜（荧光层析配对组合）
氨基末端脑利钠肽前体（NT-proBNP）标记	DKY0090N-1mg
NT-proBNP抗原	EKY0089E	Calibrator or Quality Control
NT-proBNP抗原	EKY0089F	Calibrator or Quality Control
氨基末端脑利钠肽前（NT-proBNP）包被（货号：EKY0090L-1mg）-羧基磁珠浓缩液	DKY1309A
氨基末端脑利钠肽前（NT-proBNP）标记（货号：EKY0090M-1mg）-吖啶酯浓缩液	DKY1309B
氨基末端脑利钠肽前（NT-proBNP）包被（货号：EKY0090P-1mg）-羧基磁珠浓缩液	DKY1309D
氨基末端脑利钠肽前（NT-proBNP）标记（货号：EKY0090Q-1mg）-吖啶酯浓缩液	DKY1309E
氨基末端脑利钠肽前（NT-proBNP）标记（货号：DKY0090N-1mg）-羧基荧光微球浓缩液	DKY1309C
羧基磁珠(超顺磁)，1um	DEG0091B-1-100mg
羧基磁珠(超顺磁)，3um	DEG0091A-3-100mg
时间分辨荧光微球，羧基（200nm）	AEG0786B