胃蛋白酶原II（PGII）-磁微粒化学发光法（AE/AP）/荧光免疫层析解决方案（含保护剂评估）

来源：作者：人气：-发表时间：2024-10-25 15:35:00【大中小】

1.项目背景

摘自《中国胃癌筛查与早诊早治指南（2022）》

PG是胃蛋白酶的无活性前体，可分为PGI和PGII种亚型。PGI主要由胃体和胃底腺的主细胞和颈黏液细胞分泌，而 PGII除由胃底腺分泌外，胃窦幽门腺和近端十二指肠 Brunner腺亦可分泌。当胃黏膜发生萎缩时，血清PGI水平和（或）PGI/II比值（PGR）降低。血清中约存在人体1%的PG，其血清水平可作为胃黏膜形态和功能状态的标志，联合Hp检测可识别出胃癌的高危个体。一项纳入27项人群筛查研究和15项针对特定高危人群（如萎缩性胃炎）研究、涉及约30万例受试者的Meta分析结果显示，在一般人群研究中血清PG（PGI≤70ng/ml，PGR≤3）检测诊断胃癌的灵敏度和特异度分别为77%和73%，在特定高危人群中灵敏度和特异度分别为57%和80%。另有3项 Meta分析评估了PG检测对胃癌诊断的灵敏度和特异度，结果显示，血清PG检测对胃癌诊断的灵敏度和特异度分别为57%～69%和 73%～85%。

2.性能表现

针对PGII的检测，西宝生物推出4种单克隆抗体和1种重组抗原适合化学发光（AE/AP）和荧光层析平台。具体性能如下

（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证）。

2.1化学发光（AE）平台：

组合1（两试剂模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记吖啶酯；

组合2（三试剂模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；

组合3（三试剂模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；

线性范围：0.5ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.5ng/mL。

浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

2.2化学发光（AP）平台：

组合4（两试剂模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶；

组合5（三试剂模式）：

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）。

线性范围：0.5ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.5ng/mL。

浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

2.3荧光免疫层析平台：

组合6：

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）标记荧光微球+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）划膜；

线性范围：0.5ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.5ng/mL。

浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

2.4 稳定性评估

2.4.1 碱性磷酸酶标记抗体稳定性

A）胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶浓缩液采用AP酶标记物稀释液（货号：DCD0519A）稀释到合适浓度后，进行37℃热稳定性实验。如表1所示，PGII ALP酶工作液37℃储存热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过30%以上，表明PGII ALP酶工作液热稳定性差。

表1 PGII ALP酶工作液热稳定性3天数据（不含保护剂）

序号	PGII质控品浓度ng/mL	PGII ALP酶工作液37℃储存热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值均值差异
Q1	5	-31.0%
Q2	12.5	-35.5%
Q3	50	-33.6%
平均变化		-33.4%

B）在AP酶标记物稀释液（货号：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）配成新的AP酶稀释液，继续进行胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶的37℃热稳定性实验。如表2所示，PGII ALP酶工作液37℃储存热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在10%左右，表明PGII ALP酶工作液热稳定性良好。本实验表明蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）对PGII ALP酶工作液的稳定性有很大帮助。

表2 PGII ALP酶工作液热稳定性7天数据（含保护剂）

序号	PGII质控品浓度ng/mL	PGII ALP酶工作液37℃储存热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
Q1	5	-8.1%
Q2	12.5	-10.5%
Q3	50	-9.9%
平均变化		-9.5%

2.4.2 PGII抗原稳定性

A）采用PGII抗原稀释液（货号：DCD0521A）将PGII抗原（货号：EKY0732B）稀释成3个梯度（液体型），进行37℃热稳定性实验。如表3所示，PGII抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过80%以上，表明PGII抗原稀释梯度（液体型）热稳定性非常差。

表3 PGII抗原稀释梯度（液体型）热稳定性3天数据

序号	PGII 质控品浓度ng/mL	PGII 抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值均值差异
Q1	5	-85.0%
Q2	12.5	-85.1%
Q3	50	-87.1%
平均变化		-85.7%

B）采用PGII抗原稀释液（货号：DCD0521A）将PGII抗原（货号：EKY0732B）稀释成3个梯度做冻干（冻干型），进行37℃热稳定性实验。如表4所示，PGII抗原稀释梯度（冻干型）37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在5%左右，表明PGII抗原稀释梯度（冻干型）热稳定性良好。

表4 PGII抗原稀释梯度（冻干型）热稳定性7天数据

序号	PGII 质控品浓度ng/mL	PGII 抗原稀释梯度（冻干型）37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
Q1	5	-3.9%
Q2	12.5	-3.7%
Q3	50	-2.9%
平均变化		-3.5%

3.临床相关性

3.1化学发光（AE）平台：

西宝生物发光（AE）平台PGII抗体配对组合1（两试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好；

西宝生物发光（AE）平台PGII抗体配对组合2（三试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好。

西宝生物发光（AE）平台PGII抗体配对组合3（三试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好。

3.2化学发光（AP）平台：

西宝生物发光（AP）平台PGII抗体配对组合4（两试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好；

西宝生物发光（AP）平台PGII抗体配对组合5（三试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好。

3.3荧光免疫层析平台：

西宝生物荧光平台PGII抗体配对组合6与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性（≤20ng/mL）R²在0.90左右，相关性较好；（＜100ng/mL）R²>0.95，相关性良好。

4. 测试方案

4.1化学发光（AE）平台

4.1.1抗体配对组合1（两试剂模式）：

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGI)抗体（货号：EKN0290D）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGI)抗体（货号：EKN0289D）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。

4.1.2抗体配对组合2（三试剂模式）：

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育9min；

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

4.1.3抗体配对组合3（三试剂模式）：

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育9min；

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。

4.2化学发光（AP）平台

4.2.1抗体配对组合4（两试剂模式）：

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，进行测试。

4.2.2抗体配对组合5（三试剂模式）：

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量100ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样本+50ul试剂1+100ul试剂2混合，37℃孵育10min；

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育5min，清洗；

第三步：加入底物，进行测试。

测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。

4.3荧光免疫层析平台抗体配对组合5：

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

反应条件：

样品+稀释液混匀（本次按照1:5稀释），上样，反应时间（10min-15min）；

测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。

5.产品信息

产品名称	货号	推荐配对
AP酶标记物稀释液	DCD0519A	/
蛋白保护剂GH	DCL0009A	推荐使用浓度20%左右
PGII抗原稀释液	DCD0521A	/
胃蛋白酶原II（PGII）抗体	EKN0290D	胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289D）标记吖啶酯（发光配对组合1）胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290D）标记生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289D）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）（发光配对组合2）胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289D）标记生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290D）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）（发光配对组合3）胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶（发光配对组合4）胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289E）标记生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）（发光配对组合5）胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289E）标记荧光微球+胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290E）划膜（荧光配对组合6）
胃蛋白酶原II（PGII）抗体	EKN0289D
胃蛋白酶原II（PGII）抗体	EKN0289E
胃蛋白酶原II（PGII）抗体	EKN0290E
胃蛋白酶原（PGII）抗原	EKY0732B
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290D）包被羧基磁珠浓缩液	DKY1334A
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290D）标记生物素浓缩液	DKY1334B
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290D）标记吖啶酯浓缩液	DKY1334C
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289D）标记生物素浓缩液	DKY1334D
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289D）吖啶酯浓缩液	DKY1334E
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289E）包被羧基磁珠浓缩液	DKY1334F
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289E）标记生物素浓缩液	DKY1334G
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶浓缩液	DKY1334H
胃蛋白酶原II（PGII）抗体（货号：EKN0289E）标记荧光微球浓缩液	DKY1334I
AMPPD 发光底物液（即用型）	DCD0517A
AMPPD 发光底物液（即用型）	DCD0517B
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
链霉亲和素磁性微球，1.5um	DEG0814A-10ml
时间分辨荧光微球，羧基（200nm）	AEG0786B