用于检测细胞内多胺的荧光试剂PolyamineRED

来源：作者：人气：-发表时间：2023-10-12 10:00:00【大中小】

用于检测细胞内多胺的荧光试剂PolyamineRED

PolyamineRED是一种与多胺特异性反应，并向多胺添加红色荧光色素TAMRA的试剂。不与单胺或氨基酸反应。由于本产品可用于活细胞，因此能够简单地检测出细胞内多胺并进行半定量。

※本产品基于国立研究开发法人理化学研究所开拓研究本部田中生体机能合成化学研究室的研究成果商品化。

※本产品仅供科研使用。不可应用于临床。

PolyamineRED拥有细胞膜透过性，在细胞内与多胺发生反应并将TAMRA偶联至多胺。由于TAMRA与多胺结合后会失去膜透过性，所以可以通过清洗去除未反应的PolyamineRED，因此可选择性实现细胞内多胺的可视化。已知多胺会在癌细胞中过量产生，所以使用PolyamineRED可以检测出癌细胞中重要的多胺信号。详情请参考应用实例。

◆多胺是什么

多胺是含有两个或以上氨基的直链烷基胺的总称。已从生物体中鉴定出各种结构的多胺，主要为腐胺（putrescine），亚精胺（Spermidine）和精胺（Spermine）。以亚mM~mM的高浓度存在于哺乳动物、微生物、植物的细胞中。

据报导，它在生理pH下显示聚阳离子性，并通过与DNA / RNA和蛋白的相互作用呈现出各种生理活性。由于癌细胞中多胺合成基因ornithine decarboxylase (ODC)的过表达会引起多胺的过量产生，因此多胺有望成为癌症标记物。但是，由于多胺的结构简单因而难以分析，限通过HPLC的低通量分析。

另外，分析多胺必须在细胞破裂后进行去除蛋白和其他小分子的前处理，所以可能会因前处理产生偏差。因此，无需前处理便可在活细胞内定量多胺的方法备受期待。

PolyamineRED为理化学研究所田中主任研究员等所开发的新型多胺检测试剂，是一款特异性标记细胞内多胺的TAMRA并使其可视化的多胺检测试剂。

多胺在生物体内合成的路径

◆特点

●　PolyamineRED是一款利用甘氨酸炔丙基酯与多胺特异性且快速反应的试剂。可通过在多胺标记TAMRA使细胞内多胺可视化。

●　可用罗丹明滤光片组观察（激发/发射波长：560 nm/585 nm）。

●　对多胺（腐胺，亚精胺，精胺）显示高特异性，几乎不与氨基酸或单胺反应。

●　拥有细胞膜透过性，可用于活细胞的多胺检测。可通过清洗去除未反应试剂，而多胺-TAMRA复合物因多胺的聚阳离子性保留在细胞内。

●　无需前处理，仅需简单地操作即可检测细胞内多胺。

●　可通过细胞内荧光强度半定量多胺总量。*

●　可观察细胞内多胺的分布情况。

* 由于可检测出多胺总量，所以不能定量单个多胺种类。

◆应用

●　细胞内多胺的半定量

●　评价多胺在细胞内的分布情况

◆原著论文

K. Vong, K. Tsubokura, Y. Nakao, T. Tanei, S. Noguchi, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, Chem. Commun., 53, 8403～8406 (2017)."Cancer cell targeting driven by selective polyamine reactivity with glycine propargyl esters."

◆操作方法概要

1. 添加终浓度10~30 μM的PolyamineRED至新制备的培养基中。

2. 去除培养细胞的培养基，使用PBS清洗两遍。

3. 添加含有PolyamineRED的培养基。

4. 培养10 min以上。

5. 使用PBS清洗细胞三遍。

6. 甲醛固定后，进行任意染色并观察。

※甲醇固定可能会导致多胺成分泄漏出细胞外，因此不建议使用甲醇固定。

◆应用实例

癌细胞与非癌细胞的多胺检测

使用30 μM的PolyamineRED处理3种癌细胞（MCF7，MDA-MB-231，SK-BR-3）与2种非癌细胞（MCF10A，淋巴球）10 min，使用PBS清洗三遍，在DAPI染色后用福尔马林固定细胞。在癌细胞中观察到了TAMRA信号。另一方面，由于非癌细胞中的多胺数量较少，因此在MCF10与淋巴球中几乎检测不出TAMRA信号。

多胺在细胞内的分布

使用30 μM的PolyamineRED处理MDA-MB-231 10 min后进行DAPI染色并固定细胞。在MDA-MB-231中，细胞核内检测出的多胺比细胞质多。使用PolyamineRED，可以评价细胞内多胺的分布情况。

参考：甘氨酸炔丙基酯的多胺特异性

使用HPLC追溯甘氨酸炔丙基酯的模型分子（Benzyloxycarbonyl glycine propagyl ester）与多胺（腐胺，亚精胺，精胺），氨基酸以及单胺的反应。

仅与多胺（精胺，亚精胺，腐胺）发生反应，而对单胺（肾上腺素）和氨基酸（赖氨酸）几乎不反应。由此可知，氨基数越多，对多胺的反应性越高。（引用：原著论文）

物质名称	反应率%
精胺	82%
亚精胺	78%
腐胺	66%
肾上腺素	＜1%
赖氨酸	2%

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

产品编号	产品名称	产品规格
FDV-0020	PolyamineRED (Intracellular Polyamine Detection Reagent) PolyamineRED（细胞内多胺检测试剂）	0.5 mg