呼吸道合胞病毒（RSV）-免疫层析（胶体金及彩色乳胶）解决方案

来源：作者：人气：-发表时间：2023-12-22 09:07:00【大中小】

1.项目背景

1.1呼吸道合胞病毒（RSV）背景介绍

呼吸道合胞病毒（RSV）会引起肺部和呼吸道感染。这种病毒非常普遍，大多数儿童在 2 岁前就感染过这种病毒。呼吸道合胞体病毒也可感染成人。在成人和老年人以及健康的儿童中，呼吸道合胞病毒的症状较轻，通常与普通感冒相似。通常只需要采取自我护理措施便可以缓解任何不适。呼吸道合胞病毒可导致一些人群出现严重感染，包括 12 个月及更小的宝宝（婴儿，特别是早产儿）、老年人、心肺疾病患者或任何免疫系统脆弱（免疫受损）的人群。

1.2什么是RSV

相对于流感、新冠来说，大家对RSV的关注显得微不足道，但对于婴儿和老年人来说，RSV病毒可能是致命的。根据美国疾病控制与预防中心的数据，在美国RSV病毒每年导致5.8万例5岁以下的儿童和17.7万例65岁及以上的老年人住院，其中，1.3万例老年人死亡。呼吸道合胞病毒（RSV）属于副黏病毒科、肺病毒属的单股、负链RNA病毒。根据基因组序列RSV分为A、B两种亚型，两种亚型的毒株可同时引起传播感染，但一般只有一种亚型的毒株占主导地位。RSV是一种包膜病毒，RSV病毒颗粒直径100-300nm，基因组长约15.2kb，包含10个基因，编码11种蛋白质。其中两个跨膜蛋白G蛋白和F蛋白是病毒的两个主要保护性抗原。

图1 RSVRNA基因组（图源:来自网络）

融合蛋白（Fusion protein, F）被宿主蛋白酶切割成F1和F2两个片段后才具有活性，能引起病毒囊膜与宿主细胞膜融合，在RSV感染引发的免疫病理中起作用，是目前抗体、疫苗及其他治疗性药物研发的热点蛋白。

表面黏附糖蛋白（Attachment glycoprotein, G）主要负责对宿主细胞的附着，使RSV吸附于宿主细胞上导致感染开始。G蛋白在不同菌株间存在差异，保守性不如F蛋白高。核衣壳蛋白（Nucleoprotein, N）包裹病毒基因组，形成核蛋白复合体。

RSV相关蛋白、抗体等试剂在疫苗开发、药物开发以及诊断试剂开发中的应用。

1.3在诊断试剂开发中的应用

RSV是免疫缺陷人群及婴幼儿严重呼吸道疾病的主要致病因子，在世界范围内发病率和死亡率都很高。早期和准确的诊断RSV对合适的治疗至关重要。 RSV抗原检测方法常用的有ELISA和免疫荧光法，而基于切向流技术的RSV抗原检测具有便携、快速、可实现床旁检测等优势。随着检测技术的发展，RSV检测方法的灵敏度和特异性也在不断提高。而抗原、抗体是免疫学检测试剂的主要生物活性组分，直接影响检测结果的特异性和灵敏度。

1.4 RSV传统的检测方法

ELISA法和免疫荧光法是传统的RSV检测方法。一种低成本的改良ELISA方法已经被开发出来，其检测RSV 的F蛋白，可以在25分钟内检测出RSV。免疫荧光法可以使用荧光标记的一抗或二抗快速检测RSV抗原。例如，直接荧光抗体法(direct fluorescent antibody assay, DFA)要求标本中有一定数量的细胞，其灵敏度和特异度分别为94%和96.8%，因其简便、快速而被临床实验室广泛用于RSV的检测。

另一种快速RSV检测方法是：基于免疫层析技术的侧流免疫分析法(Lateral flow immunoassay，LFIA，使用的是鼻腔洗液或分泌物样本。目前市场上有许多LFIA试剂盒，如BD Directigen EZ RSV、Binax now RSV、RSV Respi-Strip、Remel Xpect、QuickLab RSV test等。

还有一种就是RCR检测方法：PCR方法以巢式RT-PCR技术为基础，利用RSV-A或-B的F基因设计外引物和内引物。该方法已在成人感染的诊断中得到应用。它可以用于检测低病毒滴度的样品，并敏感地鉴定使用基于抗原的检测方法。

西宝生物开发的高质量RSV N重组蛋白和RSV F重组蛋白，可应用于RSV抗原检测试剂核心原料（抗体对）的制备和筛选，也可做为抗原检测试剂的质控品。西宝生物研发团队还筛选出优质的配对抗体为RSV抗原检测试剂盒开发者保驾护航。

2.测试方案及性能表现

2.1胶体金免疫层析平台：

2.1.1抗体配对组合：呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828A）标记胶体金（喷在释放垫上）+呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828B）划膜；

2.1.2 呼吸道（RSV）合胞病毒抗原（货号：EKY0217B）用合适的稀释液依次稀释到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL。

2.1.3反应模式：10uL样品+90uL稀释液混匀，取80uL混合液上样，反应时间15min-20min；

2.1.4 实验结果：在胶体金免疫层析平台，采用此抗体配对组合测试呼吸道（RSV）合胞病毒抗原稀释梯度均显色，测试三例阴性样品均不显色，灵敏度可达5ng/mL，表明此抗体配对在胶体金层析平台测试性能良好。

胶体金层析平台测试示意图

2.2彩色乳胶免疫层析平台：

2.2.1抗体配对组合：呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828B）标记彩色乳胶（喷在释放垫上）+呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828A）划膜划膜；

2.2.2 呼吸道（RSV）合胞病毒抗原（货号：EKY0217B）用合适的稀释液依次稀释到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、1ng/mL、0.2ng/mL。

2.2.3反应模式：10uL样品+90uL稀释液混匀，取80uL混合液上样，反应时间15min-20min；

2.2.4 实验结果：在彩色乳胶免疫层析平台，采用此抗体配对组合测试呼吸道（RSV）合胞病毒抗原稀释梯度均显色，测试三例阴性样品均不显色，灵敏度可达0.2ng/mL，表明此抗体配对在彩色乳胶免疫层析平台测试性能良好。

彩色乳胶层析平台测试示意图

3.产品信息

产品名称	货号	推荐配对
人呼吸道合胞病毒（RSV）抗体	EKY0828A	呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828A）标记胶体金+呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828B）划膜（胶体金层析配对组合）呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828B）标记彩色乳胶+呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828A）划膜（彩色乳胶层析配对组合）
人呼吸道合胞病毒（RSV）抗体	EKY0828B
呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828A）-胶体金浓缩液	DKY1325A
呼吸道合胞病毒（RSV）抗体（货号：EKY0828B）-彩色乳胶浓缩液	DKY1325B
胶体金（40nm，1OD）	DXJ9917B-100ml
红色羧基乳胶微球，400nm	DEG0809A-10ml
呼吸道（RSV）合胞病毒抗原	EKY0217B