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Seebio(R) 高活性重组碱性磷酸酶(ALP)

来源:作者:人气:-发表时间:2024-09-03 13:41:00【
背景介绍
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一种膜结合糖蛋白。AP在自然界中广泛分布,包括原核生物和更高的真核生物。其活性位点中包括两个锌离子和一个镁离子,这三个位点的金属离子对于酶活性至关重要。碱性磷酸酶可以水解各种单磷酸酯,并释放无机磷酸盐。1,2-二氧杂环丁烷化合物AMPPD作为一种超灵敏的碱性磷酸酶底物,在碱性磷酸酶的催化作用下,磷酸根基团水解,形成一个不稳定的中间体,自行分解后四元环断裂释放出大量能量,从而激发化学发光反应。因此磁珠-抗体偶联物与碱性磷酸酶-抗体偶联物在化学发光试剂盒中可作为固相捕获试剂和酶标试剂用于检测血清中的痕量抗原。与辣根过氧化物酶(HRP)相比,碱性磷酸酶具有稳定性和高敏感性的优势。AP在生物学尤其是分子生物学和免疫学领域有着广泛的应用。
随着酶促化学发光检测技术的发展,酶偶联抗体及其偶联方法受到广泛关注。目前常用的碱性磷酸酶偶联方法有SMCC异性双功能偶联法、过碘酸钠氧化法、碳二亚胺法和等。过碘酸钠氧化法是先将酶进行醛基化,然后和抗体偶联,这种操作比较复杂,偶联产物有效活性浓度低。碳二亚胺法利用碳二亚胺类物质对蛋白质进行羧基化,这种方法容易形成蛋白分子间的自身聚合,产生非均一性产物。SMCC异性双功能偶联法利用SMCC的异性官能团,分别连接碱性磷酸酶和抗体,这种方法相比过碘酸钠法和碳二亚胺法偶联效率高。
《BIOCONJUGATE TECHNIQUES》中介绍了部分SMCC法标记酶的原理:
a)SMCC与酶分子上的胺基反应产生马来酰亚胺活化衍生物,能够与含巯基的抗体分子偶联(如图一所示);
b)抗体可以在其胺基上用2-亚氨基硫烷修饰,以形成与SMCC活化酶结合的巯基。衍生化酶上的马来酰亚胺基团与抗体上的硫醇反应形成硫醚键(如图二所示)。

图1 SMCC活化酶

图2 抗体活化及连接酶
西宝生物创新研发团队依托现有技术平台自主研发生产的ALP碱性磷酸酶产品,性能稳定、活性高,可完美替代进口品牌,且经众多客户的反复测评得到了大家的一致认可。此酶在化学发光平台经过多个临床项目验证,信噪比、精密度、稳定性等与进口品牌性能持平。欢迎索样测试,服务热线:400-021-8158
Seebio® 重组碱性磷酸酶产品详情
产品编号
DCE0108L
产品名称
Alkaline Phosphatase recombinant(Highly Active) 
Seebio® 重组碱性磷酸酶(高活性)
EC 号
3.1.3.1
Cas号
9001-78-9
来源
Bovine intestinal mucosa
小牛肠粘膜
比活
≥7000U/mg
纯度
≥96%(HPLC)
表达
CHO-K1
分子量
≈62kDa
糖基化
18±5%
外观
澄清液体
规格
5mg,10mg,50mg,100mg
浓度
14-21mg/ml(具体参考随货COA)
储存缓冲液
3MNaCl,5mMMgCl2,0.2mMZnCl2,30mMTEA,PH7.6
酶活定义
在37℃、pH 9.5条件下,一个单位的碱性磷酸酶每分钟能够水解对硝基苯酚磷酸盐(pNPP)产生1µmol对硝基苯酚(pNP)。
储存运输
Store at 2°C to 8°C. DO NOT FREEZE.
产品用途(ALP):
Ø 在免疫系统中重组碱性磷酸酶ALP偶联到蛋白上(抗体、链霉亲和素等) ,识别目标分子(底物);
Ø 在分子生物学系统中ALP用在DNA或RNA的5'-末端去磷酸以防止自连;
Ø 经ALP去磷酸化作用后, DNA或RNA还可被放射性标记磷酸盐标记(通过T4多核苷酸激酶) ;
Ø ALP还常用来蛋白的去磷酸化实验,比如酪蛋白和核酸等;
Seebio® 碱性磷酸酶产品优势:
u 性价比高,可直接平替进口品牌
u 包装规格灵活适合研发到生产
u 精密度、信噪比良好
u 比活性高,性能优异
Seebio® 碱性磷酸酶与进口R品牌-2103 ALP酶性能对比(实测案例)
1.1  ALP标记IL-6项目(SMCC法)
分别采用进口R品牌-2103 ALP酶及西宝自产三个批次ALP酶(货号:DCE0108L)标记人白介素6(IL-6)抗体(货号:EKY0129D),搭配磁珠(货号:DEG0814A)包被人白介素6(IL-6)抗体1(货号:EKY0129Z)测试40例临床样本(罗氏IL-6电化学发光试剂盒赋值)及测试精密度。
由表1数据可知,进口R品牌-2103 ALP酶标记IL-6抗体及西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床相关性r分别为0.996、0.998、0.997、0.997,表明西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床相关性良好;此外,西宝三个批次ALP酶分别与进口R品牌-2103 ALP酶测试IL-6样本的平均偏差分别为4.9%、3.7%、6.8%,表明西宝三个批次ALP酶与进口R品牌-2103 ALP酶差异很小。
由表2数据可知,进口R品牌-2103 ALP酶标记IL-6抗体及西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试IL-6样本精密度分别为1.6%、1.1%、2.4%、2.0%,表明西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床样本精密度良好。
表1 进口R品牌-2103 ALP酶与西宝ALP测试IL-6临床样本数据
序号
临床样本结果
pg/mL
进口R品牌-2103 ALP酶
发光值
西宝ALP酶批次1
发光值
西宝ALP酶批次1与进口R品牌 ALP酶发光值偏差
西宝ALP酶批次2
发光值
西宝ALP酶批次2与进口R品牌 ALP酶发光值偏差
西宝ALP酶批次3
发光值
西宝ALP酶批次3与进口R品牌ALP酶发光值偏差
1
3.5
16454
16292
-1.0%
15757
-4.2%
15807
-3.9%
2
8
78293
78589
0.4%
79500
1.5%
79781
1.9%
3
9.9
54224
53352
-1.6%
52407
-3.4%
52404
-3.4%
4
22
86209
87244
1.2%
83819
-2.8%
86418
0.2%
5
37.5
147872
149135
0.9%
149388
1.0%
149391
1.0%
6
93.1
560502
580377
3.5%
577876
3.1%
586633
4.7%
7
124
716900
745133
3.9%
738282
3.0%
777282
8.4%
8
172
998616
1054358
5.6%
1055302
5.7%
1064425
6.6%
9
265
1386708
1428782
3.0%
1455081
4.9%
1490701
7.5%
10
335
1614700
1737159
7.6%
1760949
9.1%
1816254
12.5%
11
420
2361064
2408001
2.0%
2397694
1.6%
2423464
2.6%
12
480
2443803
2769192
13.3%
2779887
13.8%
2955628
20.9%
13
501
3125606
3118765
-0.2%
3122118
-0.1%
3144256
0.6%
14
628
3855067
3913636
1.5%
3907211
1.4%
4020092
4.3%
15
696
4017892
4122175
2.6%
4096585
2.0%
4280100
6.5%
16
701
4083067
4247255
4.0%
4344028
6.4%
4400938
7.8%
17
726
4225532
4469107
5.8%
4495679
6.4%
4595290
8.8%
18
730
4508639
4736976
5.1%
4797685
6.4%
4869524
8.0%
19
770
4706747
4838610
2.8%
4803327
2.1%
4860497
3.3%
20
796
3898043
3892002
-0.2%
4009443
2.9%
4016326
3.0%
21
808
5016175
5362475
6.9%
5446715
8.6%
5731708
14.3%
22
906
5093624
5583530
9.6%
5642083
10.8%
5797631
13.8%
23
917
4998220
5244388
4.9%
5264124
5.3%
5464788
9.3%
24
1006
5963813
6016913
0.9%
5936651
-0.5%
6167906
3.4%
25
1151
6280109
6929295
10.3%
6709239
6.8%
7074086
12.6%
26
1273
7262420
7531359
3.7%
7340057
1.1%
7918713
9.0%
27
1338
8032354
8319439
3.6%
8074112
0.5%
8473877
5.5%
28
1589
9207820
10237345
11.2%
10084827
9.5%
10223535
11.0%
29
1620
7897977
8791113
11.3%
8539931
8.1%
8970500
13.6%
30
1643
9436901
9831585
4.2%
9644512
2.2%
9899838
4.9%
31
1715
8221675
8973158
9.1%
8612254
4.8%
9280061
12.9%
32
2392
13014440
13814081
6.1%
13571809
4.3%
14035617
7.8%
33
2400
13186553
14322248
8.6%
14080616
6.8%
14227579
7.9%
34
2461
13943949
15052059
7.9%
13935503
-0.1%
14771469
5.9%
35
2787
14705924
15678163
6.6%
15075300
2.5%
15191596
3.3%
36
2978
16191512
17931378
10.7%
17329603
7.0%
18189724
12.3%
37
3086
15703759
16729867
6.5%
16025149
2.0%
16274521
3.6%
38
3350
18966851
19607273
3.4%
18836694
-0.7%
19794690
4.4%
39
4867
27452953
28200561
2.7%
27552238
0.4%
27967031
1.9%
40
4972
30247224
30997514
2.5%
30534998
1.0%
30018220
-0.8%
S0
稀释液
8328
8413
1.0%
8391
0.8%
8545
2.6%
S0
稀释液
8308
8379
0.9%
8282
-0.3%
8510
2.4%
 
临床相关系数r
0.996
0.998
4.9%
0.997
3.7%
0.997
6.8%
表2 进口R品牌-2103 ALP酶与西宝ALP测试IL-6精密度数据
序号
临床样本结果
pg/mL
进口R品牌-2103 ALP酶
发光值
西宝ALP酶批次1
发光值
西宝ALP酶批次1与进口R品牌ALP酶发光值偏差
西宝ALP酶批次2
发光值
西宝ALP酶批次2与进口R品牌ALP酶发光值偏差
西宝ALP酶批次3
发光值
西宝ALP酶批次3与进口R品牌ALP酶发光值偏差
41
633
3845571
3949450
2.7%
3982366
3.6%
3968414
3.2%
3917877
3974738
1.5%
3926552
0.2%
3886784
-0.8%
3825928
3981113
4.1%
3912958
2.3%
3951069
3.3%
3841732
3939175
2.5%
3846453
0.1%
3955463
3.0%
3942931
3961147
0.5%
4091255
3.8%
3989053
1.2%
3959783
3986780
0.7%
3929881
-0.8%
3997605
1.0%
3944931
3951275
0.2%
3838714
-2.7%
3816604
-3.3%
3976657
4081661
2.6%
3933418
-1.1%
4019027
1.1%
3928228
4021525
2.4%
4093691
4.2%
3944612
0.4%
4014240
3978290
-0.9%
4087308
1.8%
4116932
2.6%
 
mean
3919788
3982515
1.6%
3964260
1.1%
3964556
1.2%
SD
62723
41971
96710
79228
CV
1.6%
1.1%
2.4%
2.0%
1.2  ALP标记PG I项目(SMCC法)
分别采用进口R品牌-2103 ALP酶及西宝自产三个批次ALP酶(货号:DCE0108L)标记胃蛋白酶原(PGI)单抗(货号:EKN0288E),搭配磁珠(货号:DEG0800C)包被胃蛋白酶原(PGI)单抗(货号:EKN0287E)测试40例临床样本(迈瑞PGI化学发光试剂盒赋值)及测试精密度。
由表3数据可知,进口R品牌-2103 ALP酶标记PGI抗体及西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床相关性r分别为0.982、0.986、0.985、0.983,表明西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床相关性良好;此外,西宝三个批次ALP酶分别与进口R品牌-2103 ALP酶测试PGI样本的平均偏差分别为10.3%、6.4%、10.4%,表明西宝三个批次ALP酶与进口R品牌-2103 ALP酶差异很小。
由表4数据可知,进口R品牌-2103 ALP酶标记PGI抗体及西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试PGI样本精密度分别为1.5%、2.1%、1.7%、1.7%,表明西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床样本精密度良好。
表3 进口R品牌-2103 ALP酶与西宝ALP测试PG I临床样本数据
序号
临床样本结果
ng/mL
进口R品牌-2103 ALP酶
发光值
西宝ALP酶批次1
发光值
西宝ALP酶批次1与进口R品牌ALP酶发光值偏差
西宝ALP酶批次2
发光值
西宝ALP酶批次2与进口R品牌ALP酶发光值偏差
西宝ALP酶批次3
发光值
西宝ALP酶批次3与进口R品牌ALP酶发光值偏差
1
5.92
401464
442002
10.1%
430291
7.2%
469496
16.9%
2
39.6
3199323
3973566
24.2%
3626535
13.4%
3695776
15.5%
3
40.1
3595262
3823900
6.4%
3641734
1.3%
3776956
5.1%
4
41.4
3514499
3863739
9.9%
3686566
4.9%
3723622
6.0%
5
41.65
4297406
4551157
5.9%
4600087
7.0%
4615690
7.4%
6
43.9
4247408
4696695
10.6%
4526134
6.6%
4502288
6.0%
7
48.27
5016661
5379793
7.2%
5357017
6.8%
5577085
11.2%
8
59.59
6047655
6220034
2.9%
6130743
1.4%
6271263
3.7%
9
63.07
6191726
6714552
8.4%
6581244
6.3%
6748646
9.0%
10
65.79
6678406
7725101
15.7%
7675146
14.9%
7759540
16.2%
11
71.21
7318119
8285405
13.2%
7640666
4.4%
8083979
10.5%
12
71.24
8000448
9442209
18.0%
9013869
12.7%
9280189
16.0%
13
73.62
7523106
8270218
9.9%
8000410
6.3%
8612540
14.5%
14
77.43
7069697
7590059
7.4%
7411316
4.8%
7623158
7.8%
15
79.02
8655807
9138468
5.6%
9214973
6.5%
9079234
4.9%
16
81.03
9112084
9893103
8.6%
9481555
4.1%
9737635
6.9%
17
88.62
8440563
9097967
7.8%
9076898
7.5%
9156597
8.5%
18
90.70
9263666
10081980
8.8%
9628447
3.9%
9818393
6.0%
19
91.63
10211666
11248455
10.2%
10518376
3.0%
10985503
7.6%
20
92.29
8409493
10189549
21.2%
9913156
17.9%
10509499
25.0%
21
93.38
9369800
10081835
7.6%
9600133
2.5%
10038535
7.1%
22
96.84
10267586
11289053
9.9%
10968039
6.8%
11296835
10.0%
23
104.02
10867034
11605424
6.8%
11218455
3.2%
11791388
8.5%
24
105.05
12930162
14297444
10.6%
14030865
8.5%
14766310
14.2%
25
105.16
10030385
11532333
15.0%
11516308
14.8%
11489410
14.5%
26
105.99
11789598
12471587
5.8%
11931351
1.2%
13161046
11.6%
27
107.29
11553097
13241305
14.6%
12447242
7.7%
13219430
14.4%
28
110.47
13187680
13797645
4.6%
13060039
-1.0%
14782314
12.1%
29
113.04
9946242
12346848
24.1%
11159606
12.2%
11700477
17.6%
30
113.20
11601795
12396364
6.8%
11798328
1.7%
12683563
9.3%
31
115.12
12692504
13355756
5.2%
12712097
0.2%
13411513
5.7%
32
125.01
12762964
14251816
11.7%
14607248
14.5%
14431858
13.1%
33
125.46
12915163
14274538
10.5%
13371808
3.5%
13794939
6.8%
34
129.25
13000841
14225615
9.4%
14160303
8.9%
14281469
9.9%
35
132.22
14919851
16260773
9.0%
15569348
4.4%
15752080
5.6%
36
142.24
15712824
17785424
13.2%
16700165
6.3%
17359360
10.5%
37
142.82
15512075
16673442
7.5%
16313601
5.2%
16873988
8.8%
38
148.91
16918474
17955282
6.1%
17391399
2.8%
18284928
8.1%
39
172.15
16579359
18716715
12.9%
17307071
4.4%
18262788
10.2%
40
194.97
19647477
21400145
8.9%
21268634
8.3%
22286095
13.4%
S0
稀释液
7089
7168
1.1%
6950
-2.0%
7189
1.4%
S0
稀释液
6964
7032
1.0%
6886
-1.1%
9720
39.6%
 
临床相关系数r
0.982
0.986
10.3%
0.985
6.4%
0.983
10.4%
表4 罗氏ALP与西宝ALP测试PGI精密度数据
编号
临床样本结果
ng/mL
进口R品牌-2103 ALP酶
发光值
西宝ALP酶批次1
发光值
西宝ALP酶批次1与进口R品牌ALP酶发光值偏差
西宝ALP酶批次2
发光值
西宝ALP酶批次2与进口R品牌ALP酶发光值偏差
西宝ALP酶批次3
发光值
西宝ALP酶批次3与进口R品牌ALP酶发光值偏差
41
73.41
7877919
8339922
5.9%
8293208
5.3%
8726632
10.8%
7793302
8421988
8.1%
8600608
10.4%
8652174
11.0%
7797740
8332840
6.9%
8564956
9.8%
8446239
8.3%
7862110
8618334
9.6%
8213756
4.5%
8278822
5.3%
8054737
8828634
9.6%
8515124
5.7%
8751994
8.7%
7812837
8585820
9.9%
8394207
7.4%
8577867
9.8%
7921397
8762108
10.6%
8300025
4.8%
8516509
7.5%
8111839
8422760
3.8%
8281807
2.1%
8662195
6.8%
7781729
8655701
11.2%
8198664
5.4%
8505551
9.3%
7777237
8416163
8.2%
8326847
7.1%
8475487
9.0%
 
mean
7879085
8538427
8.4%
8368920
6.2%
8559347
8.6%
SD
118004
176444
144155
144485
CV
1.5%
2.1%
1.7%
1.7%
Seebio® 碱性磷酸酶测试其他项目性能同样良好
采用西宝ALP酶(货号:DCE0108L)分别对25-羟基维生素D(双抗夹心法)、幽门螺杆菌(HP.CagA)、胃蛋白酶原I(PGI)、D-二聚体(D-Dimer)、血栓调节蛋白(TM)、白介素-6(IL-6)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、糖类抗原125(CA125)、肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)等项目进行验证,临床效果表现良好,具体详情请参考西宝生物相关免疫诊断解决方案
西宝生物可免费提供碱性磷酸酶ALP标记工艺(SMCC法),具体详情询Seebio相关人员
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产品名称
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