血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）- 磁微粒化学发光法

来源：作者：人气：-发表时间：2025-05-12 16:08:00【大中小】

1. 项目背景

凝血酶的生成是凝血途径的核心，它催化纤维蛋白原转化为纤维蛋白形成血栓。由于它在体内的半衰期极短，只有几秒钟，因此测定困难。血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）在纤维蛋白聚合物形成过程中产生，是凝血酶生成后与抗凝血酶1:1结合形成的复合物，在血浆的半衰期约3-15分钟，可间接反映凝血酶的生成量，是凝血系统启动的标志，可直接、灵敏地反映凝血系统的活化程度，并进一步早期预测血栓的形成和再栓的复发。同时，TAT也是抗凝治疗的敏感指标，TAT水平升高提示凝血酶合成增加、凝血功能亢进，机体处于高凝状态。

日本血栓止血学会的学术标准化委员会《纤溶优势型DIC的病态诊断指南（2006年）》中，将“TAT≥20μg/L且PIC≥10μg/mL”作为诊断必要条件。即使是血小板计数＜120×10⁹μg/mL的感染性疾病患者（仍存在血小板消耗性减少），如TAT＜7ng/mL，提示发生DIC风险较低。TAT对于感染性疾病患者的DIC趋势预测，是一种阴性预测值较高的标志物。下图是TAT的作用机制。

2. 性能表现

针对血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）的检测，西宝生物推出4种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）

2.1化学发光（AE）平台

组合1：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965B）标记吖啶酯；

线性范围：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低检出限：0.4 ng/mL。

2.2化学发光（AP）平台

组合1：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965C）标记碱性磷酸酶（DCE0108L）；

线性范围：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低检出限：0.4 ng/mL。

2.3 稳定性评估

2.3.1 磁珠包被抗体稳定性

采用磁珠标记物稀释液（货号：DCD0532A）将凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964C）包被羧基磁珠浓缩液稀释成磁珠工作液，进行37℃热稳定性实验。如表1所示：

TAT磁珠工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内（不含S0），表明TAT磁珠工作液热稳定性良好。

表1 TAT磁珠工作液稳定性7天数据

序号	TAT抗原稀释浓度ng/mL	TAT 磁珠工作液37℃ 热加速7天与2℃ -8℃储存7天发光值均值差异
S0	0	-0.2%
S1	2	-5.4%
S2	6.91	-5.4%
S3	16.88	-10.7%
S4	40.73	-5.2%
S5	70.95	-7.6%
平均变化（不含S0）		-6.9%

2.3.2 碱性磷酸酶标记抗体及磁珠包被抗体稳定性

采用碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（货号：DCD0533A）+5%左右的蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）配成新的AP酶稀释液，将凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965C）标记碱性磷酸酶浓缩液稀释成碱性磷酸酶工作液，进行37℃热稳定性实验。如表2所示：

碱性磷酸酶工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±5%以内（不含S0），表明TAT碱性磷酸酶工作液热稳定性良好。

表2 TAT碱性磷酸酶工作液稳定性7天数据

序号	TAT抗原稀释浓度ng/mL	TAT 碱性磷酸酶工作液37℃ 热加速7天与2℃ -8℃储存7天发光值均值差异
S0	0	-1.4%
S1	2	-0.9%
S2	6.91	3.2%
S3	16.88	9.3%
S4	40.73	1.7%
S5	70.95	3.3%
平均变化（不含S0）		3.3%

3. 临床相关性

3.1化学发光（AE）平台

西宝TAT抗体配对组合1（＜20 ng/mL）的发光值与希森美康 TAT发光试剂赋值临床相关性R²在0.94左右。

西宝TAT抗体配对组合1（＜120 ng/mL）的发光值与希森美康 TAT发光试剂赋值临床相关性R²在0.95左右。

3.2化学发光（AP）平台

西宝TAT抗体配对组合2（＜20 ng/mL）的发光值与希森美康 TAT发光试剂赋值临床相关性R²在0.88左右。

西宝TAT抗体配对组合2（＜120 ng/mL）的发光值与希森美康 TAT发光试剂赋值临床相关性R²在0.95左右。

西宝TAT抗体配对组合2（＜120 ng/mL）的发光值与广州万孚 TAT发光试剂赋值临床相关性R²＞0.95。

4. 测试方案

4.1化学发光（AE）平台抗体配对组合1

样本/校准品:加样量20ul；

试剂1：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0964B）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样品+50ul试剂1，37℃孵育9min，清洗；

第二步：加入50ul试剂2，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。

4.2化学发光（AP）平台抗体配对组合2

待测抗原：凝血酶-抗凝血酶复合物抗原（货号：EDD0797B）

样本/校准品:加样量10ul；

试剂1：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0964C）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号:EKY0965C）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：10ul样品+50ul试剂1，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入50ul试剂2，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入底物，进行测试。

测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。

5.产品信息

产品名称	货号	推荐配对
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体	EKY0964B	凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0965B）标记吖啶酯（发光配对组合1）
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体	EKY0965B
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体	EKY0964C	凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体3（货号：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体4（货号：EKY0965C）标记碱性磷酸酶（发光配对组合2）
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体	EKY0965C
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964B）-羧基磁珠浓缩液	DKY1327A
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0965B）-吖啶酯浓缩液	DKY1327B
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0964C）-羧基磁珠浓缩液	DKY1327C
凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）抗体（货号：EKY0965C）-碱性磷酸酶浓缩液	DKY1327D
凝血酶-抗凝血酶复合物抗原	EDD0797B
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
AMPPD 发光底物液（即用型）	DCD0517B
蛋白保护剂GH	DCL0009A	推荐使用浓度5%左右
重组碱性磷酸酶（高活性）	DCE0108L
磁珠标记物稀释液（化学发光）	DCD0532A	/
碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（化学发光）	DCD0533A	/