霍乱弧菌免疫检测相关产品

来源：作者：人气：-发表时间：2023-03-09 16:07:00【大中小】

霍乱弧菌免疫检测相关产品

◆什么是霍乱？

霍乱是一种急性肠道传染病，是我国法定的甲类传染病，也是《国境卫生检疫法》规定的检疫传染病之一。自1817年以来，曾经发生过七次世界性霍乱大流行，先后导致数千万人死亡，对部分染疫地区的民众生命健康、经济发展、社会稳定等方面造成了毁灭性打击。每年，全球大约有300万～500万人感染霍乱，死亡人数达10~12万。

◆致病菌

霍乱弧菌，是引发霍乱的“幕后黑手”，对干燥、日光、热、酸及一般消毒剂均敏感，能引起流行的有O1型和O139型，都可以分泌霍乱肠毒素，引发各种人体症状。

霍乱弧菌是一种烈性传染病，其致病菌为霍乱弧菌。根据菌体(O)抗原的不同，霍乱弧菌已被分为200个以上的O血清群。O1和O139这两种霍乱弧菌的血清型能够引起疾病暴发，非O1非O139霍乱弧菌可引起轻度腹泻，但不会造成疾病流行。O1群霍乱弧菌分为稻叶、小川和彦岛(少见)3种血清型，霍乱在世界范围内已发生了7次大流行，均由O1群引起，波及100多个国家和地区，夺去了上千万人的生命。而1992年首次在孟加拉国确定的O139血清型霍乱是近10年来肆虐于南亚，并波及亚、欧、美、非、澳五大洲的数十个国家和地区的一种新发现的烈性传染病，目前已成为全球霍乱的优势菌群。

霍乱以发病急、传播快、波及范围广为特征，是《国际卫生条例》规定的国际检疫传染病之一，也是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病之一。

世界卫生组织《预防和控制霍乱疫情》中提到：如果从任何腹泻患者的样本中分离出O1或O139霍乱孤菌，则可确认为霍乱病例。1989年至2014年世界各洲发生霍乱的病例统计，见图。

Figure1 1989-2014 WHO接收各洲霍乱病例报告

各型弧菌产生类似的肠毒素，临床表现也类似。每一次霍乱流行都会有一个特定的优势型，且流行趋势是在不断变化的。根据世界卫生组织的报告，2010年至2014年全球霍乱爆发区域见图。

2022年7月9日晚，武昌区疾控中心接医院报告，武汉大学出现一例感染性腹泻病例，以呕吐腹泻为主，伴低热，血清学凝集试验为O139阳性。经省市区三级疾控中心复核，该病例的血清学凝集试验为 O139 阳性，诊断为霍乱，毒力基因阴性。

霍乱流行迅速，且在流行期间发病率及死亡率均高，危害极大，因此早期迅速和正确的诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。

◆霍乱诊断与检测

我国《霍乱诊断标准》指出，霍乱的实验室检测要求对患者的粪便、呕吐物或肛拭子经细菌培养分离，做霍乱弧菌快速辅助检测试验，作为综合诊断霍乱的依据之一。

其实霍乱弧菌检测方式有很多，如以化学法检测粪便潜血需要采集前三天避免进食红肉、肝脏及菠菜、甘蓝、花椰菜等食物，以避免造成伪阳性结果。

因等待时间过长，限制过多，为尽早避免阳性产生的大范围传染情况，采用免疫法检测粪便潜血，为最快最直观的检测方法。

目前针对霍乱弧菌的RDT是一种基于金标抗体或荧光标记抗体的免疫层析试纸条检测技术，霍乱弧菌快速检测卡是利用单克隆抗体胶体金标记技术和膜层析技术研制而成，用于定性检测样本中可能存在的霍乱弧菌的特异性抗原 O1及O139血清型。

霍乱弧菌的快速准确检测和区分群型，对霍乱流行的检测与预防及制定相应的防治对策意义重大。 Seebio 公司自行研发的检测霍乱的抗体具有极高的灵敏度和特异性，并能够对不同的霍乱弧菌进行精确分型。同时，各抗体既可单独使用，也可联合使用，并且可以应用在不同检测平台上。这些特性在科研或者流行病监测当中有着不可替代的价值。Seebio研发人员从高效价细胞株筛选中制备的抗霍乱弧菌单克隆抗体用于免疫层析检测试剂盒的开发应用。

首先，以灭活的各霍乱弧菌为免疫原对小鼠进行免疫，细胞融合后,经间接ELISA筛选及3次连续克隆化。得到一系列杂交瘤细胞。从194株杂交瘤细胞中选得抗01群小川型霍乱弧菌单克隆抗体的2株杂交瘤细胞，分别分泌VC O1-OgawamAb1及VC 01-Ogawa mAb2 ;从237株杂交瘤细胞中选得抗01群霍乱弧菌单克隆抗体的4株杂交瘤细胞，分别分泌VC O1 mAb1, VC O1 mAb2 , VC O1 mAb3及VC O1mAb4;从286株杂交瘤细胞中选得抗O139群霍乱弧菌单克隆抗体的2株杂交瘤细胞,分别分泌VC O139 mAb1及VC0139 mAb2。并对筛选的细胞株抗体做配对验证，特异性、灵敏度检测以及滴度鉴定等最终筛选出优质的抗体对产品。

Seebio公司目前研发筛选出的检测霍乱弧菌单克隆抗体能够特异性识别01-小川型、01-稻叶型和0139群霍乱弧菌,具有特异性好,灵敏度高等特点,并且适用于各种免疫平台。这些抗体可用于ELISA、Western-blot、金标试纸等不同用途的免疫学检测系统的开发。

◆Seebio霍乱弧菌抗体在ELISA中的应用

以间接ELISA检测抗体滴度示例。将各灭活的霍乱弧菌菌液以包被液稀释后包板。封闭后加入倍比稀释的·各抗霍乱弧菌抗体作为一抗，以包被液为阴性对照。再加入1:5000稀释的HRP-羊抗鼠IgG抗体作为二抗，TMB显色后于波长450nm测定OD值。

◆Seebio霍乱弧菌抗体在金标试纸中的应用

用包被和偶联抗体组装胶体金测试卡，将01-小川型、O1-稻叶型、O139群霍乱弧菌灭活菌液倍比稀释,用胶体金试纸条检测,评价各自的灵敏度。

检测结果如图所示：

金标试纸对01群小川型霍乱弧菌的检测灵敏度达10⁴cfu/mL,

对01群稻叶型霍乱弧菌检测灵敏度达10⁵cfu/mL,

对0139型霍乱弧菌检测灵敏度达10⁴cfu/mL

◆Seebio霍乱弧菌抗体在Westblot中的应用

灭活的测试菌菌液经 SDS-PAGE电泳，然后经转膜、洗膜等处理后，分别加入VC O1-OgawamAb1 , VC O1-Ogawa mAb2 , VC O139mAb1和VC O139 mAb2做为一抗，最后以HRP标记羊抗鼠IgG抗体做二抗进行检测。检测结果如图所示:

1: VC O1-Ogawa mAb1 ;2: VC O1-Ogawa mAb2; 3 : VC O139 mAb1; 4: VC O139 mAb2

◆Seebio霍乱弧菌产品详情

产品	类型	来源	规格	货号	建议使用
霍乱弧菌O1-Ogaw（O1-小川型）抗体	抗体	Mouse	1mg	EKY0305A（标记） EKY0305B（包被）	双抗夹心法 ELISA、LF平台
霍乱弧菌O1群（小川型和稻叶型）抗体	抗体	Mouse	1mg	EKY0307A（标记） EKY0307B（包被）
霍乱弧菌O139群抗体	抗体	Mouse	1mg	EKY0308A（标记） EKY0308B（包被）
霍乱弧菌O1群阳性质控品	质控			EDD0714A（阳性质控）
霍乱弧菌O139群阳性质控品	质控			EDD0712A（阳性质控）