糖类抗原19-9(CA19-9)-磁微粒化学法学发光（吖啶酯）解决方案

来源：作者：人气：-发表时间：2023-09-15 08:39:00【大中小】

1.项目背景

糖类抗原(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)是一种粘蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物，为细胞膜上的糖脂质，因由鼠单克隆抗体116NS19-9识别而命名。是迄今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠和正常成年人胰腺、胆管上皮等处。是存在于血液循环的胃肠道肿瘤相关抗原。

《中国胰腺癌诊治指南（2021）》指出：血清 CA19-9 是目前最常用的胰腺癌诊断标记物，其诊断胰腺癌的敏感度为79%～81%，特异度为82%～90%。由于CA19-9 在胆道梗阻及感染状态下亦可异常升高，故应在黄疸缓解、炎症控制后再对其进行基线检测。血清CA19-9水平可在一定程度上反映肿瘤负荷或提示有微转移灶的可能。除诊断意义外，CA19-9还有助于评估预后及疗效。胰腺癌病人术后血清CA19-9 水平升高虽可提示复发或转移，但仍应结合影像学证据等进行综合判断。约10%的胰腺癌病人为Lewis抗原阴性血型结构，此类病人不表达CA19-9，须结合其他肿瘤标记物协助诊断。癌胚抗原诊断胰腺癌的特异度与 CA19-9 类似，但敏感度仅为44.2%。CA125升高与胰腺癌术后早期远处转移相关，一定程度上反映出肿瘤转移潜能及其相关负荷，特别对CA19-9表达阴性的胰腺癌病人，CA125具有一定的预后评估价值。其他临床常用的肿瘤标记物还有 CA50、CA242、CA724等，联合应用有助于提高诊断敏感度和特异度，但仍需高级别证据支持。

2. 性能表现（化学发光（吖啶酯）平台）

2.1 抗体配对组合：

糖链抗原CA19-9（货号：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖类抗原CA19-9（货号：EKY0018O）标记吖啶酯；

2.2 具体指标

参考《YY/T 1178-2010 糖类抗原CA19-9定量测定试剂（盒）（化学发光免疫分析法）》

a. 最低检出限：不高于2.0U/mL。

用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的RLU值(相对发光值)，计算其平均值(M)和标准差(sD)，得出M+2SD，根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度一RLU值结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD的RLU值带入上述方程中，求出对应的浓度值，即为最低检测限。

CA19-9 最低检出限
空白样本（n=20）		发光值
1		2607
2		2316
3		2371
4		2353
5		2414
6		2468
7		2299
8		2670
9		2189
10		2556
11		2221
12		2358
13		2429
14		2290
15		2304
16		2374
17		2317
18		2384
19		2285
20		2267
Mean		2374
SD		123.6
M+2SD		2621
10.6 U/mL	1	32734
	2	31390
	3	30977
	Mean	31700
最低检出限 U/mL		0.07

b. 重复性：分别为2.9%及2.8%。

用 40U/mL±8U/mL和 150U/mL±30U/mL的样本各重复检测10次，计算10次测量结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV=SD/M*100％得出变异系数CV。其变异系数(CV)应不大于10％(仪器自动操作法)或不大于15％(手工操作法)。

CA19-9 重复性
序号	发光值	浓度值U/mL	发光值	浓度值U/mL
1	112817	40.73	490445	174.91
2	112570	40.64	488938	174.38
3	105906	38.24	497560	177.43
4	111795	40.36	478194	170.57
5	110967	40.06	472592	168.59
6	109292	39.46	488909	174.37
7	104306	37.66	469210	167.39
8	109133	39.40	477034	170.16
9	105000	37.91	451853	161.25
10	110520	39.90	491164	175.17
M	109230.6	39.44	480589.9	171.42
SD	3135.5	1.1	13636.1	4.8
CV	2.9%	2.9%	2.8%	2.8%

c. 线性范围：1 U/mL-1000 U/mL。

将接近线性范围上限的高值样本按一定比例稀释为至少5种浓度，其中低值浓度的样本须接近线性范围的下限。按试剂(盒)说明书进行操作，每一浓度重复检测2次，计算平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r。

线性范围上限不应低于参考值的5倍，下限应低于参考值的1/5（参考罗氏CA19-9参考值为27 U/mL (第95百分位数)、34 U/mL (第97.5百分位数)、39 U/mL (第99百分位数)）。在生产企业所规定的线性范围内，试剂(盒)的相关系数r应≥0.99。

CA19-9 线性
线性	实测值均值U/mL	理论值U/mL
线性1	1.60	0.91
线性2	4.95	3.64
线性3	19.28	14.57
线性4	73.82	58.29
线性5	264.28	233.17
线性6	932.67	932.67
线性相关系数r		0.9994

d. 回收率：98.3%。

将浓度约为200U/mL(允许偏差为±20％)的糖类抗原CA19-9样品(A)加入血清或其他相应的基质样品B中，所加入A的体积宜不超过总体积（A+B）的10%。

回收率应在(85％～115%)范围内。

序号	混合样本U/mL	低值样本U/mL	高值样本U/mL
1	37.58	23.04	174.91
2	37.04	22.11	174.38
3	37.87	22.33	177.43
均值	37.50	22.49	175.57
回收率	98.3%

3.临床相关性（化学发光（吖啶酯）平台）

西宝生物发光平台CA19-9抗体配对与Roche CA19-9试剂赋值的临床样本（高值部分）相关性R²>0.95，相关性良好；低值部分（≤100 U/mL）相关性R²>0.95，相关性同样较好。

4.测试方案

特别注明：

1）若客户采用吖啶酯体系，建议CA19-9抗体与吖啶酯的标记摩尔比在1:4左右；

2）若客户采用碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶体系，建议优化酶与抗体标记的摩尔比例。

待测样本:加样量20ul；

试剂1：糖类抗原CA19-9（货号：EKY0018N）-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：糖类抗原CA19-9（货号：EKY0018O）-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样本+50ul试剂1混合，37℃孵育9min，清洗；

第二步：加入50ul试剂2混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S；可适用于各类吖啶酯体系的化学发光仪器（如四川迈克、深圳亚辉龙、山东康华生物、基蛋生物、南京诺尔曼等）

5.产品信息(可提供大包装试剂)

产品名称	货号	推荐配对
糖类抗原CA19-9单克隆抗体	EKY0018N	糖类抗原CA19-9（货号：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖类抗原CA19-9（货号：EKY0018O）标记吖啶酯（抗体配对组合）
糖类抗原CA19-9单克隆抗体	EKY0018O
糖类抗原CA19-9抗体（货号：eky 0018N）-羧基磁珠浓缩液	DKY1318A
糖类抗原CA19-9抗体（货号：EKY0018O）-吖啶酯浓缩液	DKY1318B
羧基磁珠(超顺磁)，1um	DEG0091B-1-100mg
羧基磁珠(超顺磁)，3um	DEG0091A-3-100mg