Cisbio HTRF技术磷酸化检测整体解决方案
pERK |
pP38 |
pSTAT3 |
pAKT |
pATF2 |
pSTAT5 |
pBAD |
pS6RP/pMEK1 |
pSTAT6 |
ERK1/2是许多信号传导通路的会聚点,所以可以用磷酸化ERK含量的变化来反应G蛋白偶联受体是否被活化或者抑制。
磷酸化ERK1/2检测是基于双抗体夹心法的原理。在试剂盒中含有两个抗体,一个抗体是抗磷酸化ERK1/2的抗体,标记d2;另一个抗体是抗ERK1/2其它位点的抗体,标记Eu。
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受体受到刺激,ERK1/2被磷酸化。在细胞膜裂解之后,磷酸化的ERK1/2释放出来,通过基于HTRF技术的双抗体夹心法被检测到。其中
试剂盒应用HTRF技术,不需要洗涤,比Western Blot、 ELISA和其它基于微珠测试的方法更加简单快速。
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磷酸化检测原理图 |
Rantes 和 MIP-Ib在室温条件下刺激CCR5受体(CHO,25,000细胞/孔),时间为10分钟,用HTRF Cellul´ERK 试剂盒来测试磷酸化ERK1/2水平。EC50分别为2.8 nM和18.8 nM,与文献报道一致。
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CHO-CCR5中ERK1/2的磷酸化水平 |
用Carbachol (卡巴胆碱)在室温刺激CHO-M1细胞,时间为10分钟(5,000细胞/孔,384浅孔板),结果如下图
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选择未刺激的细胞、1.3 μM Carbochol和4 μM Carbochol计算Z´值,分别对应实验的基础水平、EC80和EC100,每种条件50个重复,实验采用一步法。两个条件的Z´值均大于0.7,表明实验非常稳定,可用于高通量筛选。
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用PMA刺激CHO-M1细胞(50,000细胞/孔),时间为10分钟,结果如图
PMA是PKC的直接激活剂。该实验得到的EC50为9.6 nM,检测窗口为4.5。
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PMA刺激的CHO-M1细胞中ERK1/2的磷酸化水平 |
产品描述
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规格
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产品货号
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品牌
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储存条件
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ERK phospho-T202/Y204 kit
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500tests
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64ERKPEG
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Cisbio
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2-8°C
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10,000tests
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64ERKPEH
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Cisbio
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2-8°C
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ERK phospho-T202/Y204 kit
control lysate
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kit
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62ERKTDA
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Cisbio
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2-8°C
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Advanced ERK phospho-
T202 /Y204 kit
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500tests
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64AERPEG
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Cisbio
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-60℃以下
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1x96tests
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64AERPET
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Cisbio
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-60°C以下
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10,000tests
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64AERPEH
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Cisbio
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-60℃以下
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Advanced ERK phospho-
T202 /Y204 kit control lysate
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kit
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64AERTDA
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Cisbio
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2-8°C
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Phospho and Total protein blocking reagent
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2ml
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64KB1AAC
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Cisbio
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2-8°C
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6ml
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64KB1AAD
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Cisbio
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2-8°C
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Phospho-Total protein lysis buffer
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130ml
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64KL1FDF
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Cisbio
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2-8°C
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