Cisbio-HTRF筛选技术——高通量药物筛选必备神器

来源：作者：人气：-发表时间：2019-06-25 12:55:00【大中小】

Cisbio成立于1974年，总部位于法国Codolet，专为生命科学和诊断市场开发、生产和销售高质量试剂和试剂盒。与市场上现有的传统分析方法相比，Cisbio所开发的方法能够为使用者提供更灵敏的定量免疫分析。其中包括各种经过验证的药物发现筛选试剂和高通量分析试剂盒，以及仅用于体外诊断试剂盒。

具体而言，Cisbio的HTRF® 筛选技术（均相时间分辨荧光技术）是快捷方便的检测方法。西宝生物课提供Cisbio HTRF®相关检测试剂盒，货期稳定！产品线齐全！咨询订购热线：400-021-8158！

HTRF 原理

HTRF技术基于时间分辨荧光（TRF）和荧光共振能量转移（FRET）两大技术原理

时间分辨荧光（TRF）

TRF利用稀土元素中镧系元素的独特性质,与普通荧光的主要区别是荧光的持续时间不同。普通荧光的半衰期为纳秒级，镧系元素的半衰期是毫秒级，有6个数量级的差别。所以，在检测时，TRF有一个时间延迟---50微秒。经过这个时间延迟，普通荧光的信号几乎为零。所以，TRF的背景低，反映样品的实际情况。

荧光共振能量转移（FRET）

FRET技术利用了两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为能量供体（Donor）和能量受体（Acceptor）。Donor 被外来光源激发（例如氙灯或激光），如果它与Acceptor 比较接近，可以将能量共振转移到Acceptor上，使其受到激发，发出特定波长的发射光。将 Donor 和 Acceptor分别与相互作用的两个生物分子结合，生物分子的结合可以将 Donor 和 Acceptor 拉到足够近的距离，产生能量转移。由于Acceptor的发射光来自于能量转移，所以在实验中不需要将未结合与已结合的分子分开，即不需要洗涤步骤。

HTRF 的优势：

HTRF 是不需要洗涤的ELISA。其优势如下：
· 操作简单：空板直接加样，加完即可检测，时间短（加样和孵育2h）
· 体系稳定：7天内可随时检测，信号基本不变
· 适合珍贵样本：整个实验体系只需20ul
· 均相检测体系：无需包被，免洗ELISA，省时省力
· 数据客观真实：比值处理可有效去除背景荧光，假阳性率和假阴性率低
· 反映样品的实际情况，假阳性假阴性率低，可去除由于天热产物自发荧光引起的背景

HTRF 的能量供体

HTRF的能量供体是铕（Eu）和铽（Tb）的穴状化合物。

在这个穴状化合物里，Eu和Tb被永久地嵌合在一个笼子里，结构稳定。

这个结构是由J. M. Lehn's教授发明的，并由此在1987年获得了诺贝尔奖。

穴位化合物结构图

HTRF 的能量受体

HTRF的能量受体也有两种，XL665和d2。它们的光学性质相同，分子量不同。前者分子量为105 KD，实际上就是别藻蓝蛋白（APC）。我们将APC的亚基偶联在一起，使其不能解离，提高了稳定性。后者分子量为1KD，在某些实验中有独特的优势。

HTRF 的操作步骤：

HTRF的操作步骤简单，只需要将实验所需试剂加进去，然后孵育、检测即可，如下图所示。

HTRF 检测仪器多样化：

Cisbio与几乎所有的仪器供应商都建立了合作伙伴关系，下面是经过验证的仪器列表。所有这些仪器都标有HTRF®的标志。

HTRF 的应用领域：

应用产品列表：

订购咨询热线：400-021-8158

	试剂盒	应用
激酶(Kinase)	STK	1、丝氨酸、苏氨酸激酶活性检测 2、抑制剂或激动剂的筛选
	TK	1、酪氨酸激酶活性检测 2、抑制剂或激动剂的筛选
	ADP Transcreener	激酶、ATP酶活性检测，以及反应中生成ADP的定量
G蛋白偶联受体 (GPCR)	cAMP	1、Gs，Gi类受体激动剂和拮抗剂的筛选 2、PDE酶活性的检测 3、腺苷酸环化酶活性检测 4、受体活性检测
	IP-One	1、Gq类受体活性检测 2、受体激动剂和拮抗剂，别构调节剂以及反向激动剂筛选 3、缓慢激动剂的检测
	IP-One Elisa	针对科研用户推出的传统的Elisa方法 1、PLC相关受体的活性检测 2、验证GPCR功能
	Tag-lite	1、替代同位素做受体配体结合试验2、受体的二聚化试验 2、受体的二聚化实验
磷酸化蛋白	pERK	1、AKT/MAPK通路研究 2、细胞表面受体研究
磷酸化蛋白	pAKT	1、AKT/MAPK通路研究 2、细胞表面受体研究
生物标记物 (Kinase)	Amyloid beta1-40	1、Amyloid beta1-40 peptide定量 2、分泌酶活性检测
	Apo A1	1、载脂蛋白A1定量 2、核受体活性检测
	Apo B	1、载脂蛋白B定量 2、核受体活性检测
	cGMP	1、cGMP定量 2、PDE酶活性检测 3、鸟苷酸环化酶活性检测 4、受体活性检测
	Cortisol	1、Cortisol定量 2、11β-HSD1活性检测
	Estradiol	l、Estradiol定量 2、17β-HSD1活性检测
	Histamine	Histamine定量
	Insulin	Insulin定量
	PEG2	PGE2定量
	Sirt1	Sirt1酶活性检测
抗体定量	Total IgG	1、IgG定量 2、带Fc标签蛋白定量 3、人源化抗体筛选 4、抗体生产时的质控
	Kappa Mab	1、含Kappa轻链抗体的定量 2、抗体生产时的质控
	Lamda Mab	1、含Lamda轻链抗体的定量 2、抗体生产时的质控