猴痘病毒检测原料（涵盖诊断酶、抗原、抗体），西宝生物助力猴痘检测

来源：作者：人气：-发表时间：2022-08-23 11:41:00【大中小】

什么是猴痘病毒？

猴痘是痘病毒科正痘病毒属的一种。是一种罕见的病毒性人畜共患病（从动物传播给人的病毒），其病原体猴痘病毒是一种DNA（脱氧核糖核酸）病毒，属于痘病毒科正痘病毒属，与在人类历史上曾肆虐数千年的天花病毒是“近亲”。猴痘病毒于1958年被初次发现，当时一组用于研究的猴子中出现“痘状：传染病，因此得名。自WHO1980年宣布人类彻底消灭天花以来，猴痘病毒已成为对公共卫生影响较大的正痘病毒。

猴痘病毒的主要传播方式是通过直接接触到受感染的动物的血液、体液、皮肤或黏膜伤口。人类之间的二次传播主要由于密切接触了感染者的呼吸道分泌物、皮肤损伤，或被患者体液或病变组织污染的物品（如患者皮疹破裂后流出的液体沾染的衣物、床单等）。猴痘病毒能在呼吸道飞沫中存在，但通常需要长时间面对面接触才能传播。

人感染猴痘的初期症状包括发烧、头痛、肌肉酸痛、背痛、淋巴结肿大等，之后可发展为面部和身体大范围皮疹。多数感染者会在几周内康复，但也有感染者会出现严重疾病。

据世界卫生组织介绍，猴痘病毒感染症状与天花相似，但临床严重程度较轻，潜伏期通常为6至13天，可能长达21天。

由于多种痘病毒具有“交叉免疫”特点，人接种天花疫苗对防治猴痘也有效。据世界卫生组织数据显示，天花疫苗对猴痘的有效率可达85%。常见的家用消毒剂可以杀死猴痘病毒。

猴痘病毒的的检测方法

1. 核酸检测：采用核酸扩增检测方法在皮疹、疱液、痂皮、口咽或鼻咽分泌物等标本中可检测出猴痘病毒核酸。

2. 抗原/抗体检测：免疫检测方法既可用于抗原，也可用于抗体检测。但猴痘病毒与痘病毒之间存在抗原交叉，特异性不够，因此不能准确鉴别猴痘病毒，常用于流行病学调查。

3. 病毒培养：采集上述标本进行病毒培养可分离到猴痘病毒。病毒培养应当在三级及以上生物安全实验室开展。

为应对猴痘疫情，国内外众多IVD企业积极响应，推进猴痘病毒相关检测产品的研发和上市。西宝生物作为深耕于生命科学领域的一家上游成熟供应商，拥有成熟的细胞表达平台、稳定细胞系筛选平台、大分子纯化平台、蛋白结构分析平台，西宝长期为IVD企业提供品质优良、高性价比的原料。欢迎垂询400-021-8158！

一、荧光定量PCR原理

荧光定量PCR较早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。

qPCR可分为荧光染料法（SYBR Green Ⅰ法为代表）和荧光探针法（TaqMan法为代表）。

荧光探针法（Taqman 技术）：TaqMan探针法qPCR是使用TaqMan荧光探针进行荧光检测的方法。其基础原理是PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。.该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR 仪检测不到荧光信号； PCR扩增时（在延伸阶段），Taq 酶的 5' － 3' 切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成同步，这也是定量的基础所在。

TaqMan水解探针作用机理图

TaqMan探针法qPCR优点

特异性高、定量准确 - 荧光探针只与目的序列结合，理论上探针法的荧光信号只来源于目的序列，即不受非特异性产物的影响，因此，TaqMan探针法qPCR的特异性高，定量准确。

实验耗时短 - 探针法qPCR的高特异性，无需再设置熔解曲线检测扩增产物的特异性如何，大大缩短了实验时间。

多重反应可兼容，适用性强 - 不同波长的荧光报告基团可以标记不同的探针，因此可以在同一个反应体系中利用不同荧光标记的探针同时检测多个靶标，达到节省实验成本的目的。

Taqman探针法荧光PCR相关试剂原料

样本提取与纯化

产品描述	产品名称	货号	备注
核酸释放剂	核酸释放剂 Nucleic Acid Release Reagent	DAA1404A
核酸释放剂常用组分	三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(TRIS-HCl)	ACC0029A	缓冲盐
	Guanidine Thiocyanate 异硫氰酸胍	ACH0012A	蛋白质变性剂
	Guanidine hydrochloride 盐酸胍	ACH0011A	核酸酶强抑制剂
	Proteinase K 蛋白酶K	EBY0027M	高比活性
	Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠（SDS）	ACH0017A	阴离子去垢剂
	Urea 尿素	ACH0029E
	乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-2Na)	ACH0010A	重要的螯合剂

探针法qPCR检测预混液

产品描述	产品名称	货号	备注
超高灵敏度	Seebio® TaqMan multiplex qPCR master mix(探针法）	DAA1400A	单重/多重，预混液，实验方便
全预混稳定性加强版（含UDG Mg2+和dNTP）	Seebio® Enhan TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) (2XMix预混合试剂包含反应缓冲液和酶mix，已包含Mg2+和dNTP)	DAA1401A	单酶+buffer + dNTPs and Mg2+可以根据实验，优化酶，dNTP，Mg2+的投入量

单酶

产品描述	产品名称	货号	备注
热启动Taq酶	Seebio® HotStart Direct Taq DNA Polymerase	DAA1402A	-
Bst酶	Bst Ⅱ plus DNA Polymerase	DAA0792A	-
热敏UDG酶	Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile	DAA0230A	-

西宝生物可提供各种分子诊断酶产品，均可定制大包装，详情咨询西宝生物400-021-8158！或者联系我司诊断团队。

二、猴痘病毒免疫检测

猴痘病毒免疫检测方法主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IgG、IgM抗体和免疫组化检测病毒抗原。以及用MPXV抗体进行免疫化学分析,可区分痘病毒感染和疱疹病毒。

已经证实,抗病毒抗体和T细胞反应在疾病发作前后增加,在皮疹发生后5天左右和8天以上的血清中分别检测到猴痘病毒IgM和IgG。如果有皮疹和严重疾病史的未接种疫苗的个体血清中存在IgM和IgG抗体,则诊断可能存在MPXV感染。IgM捕获ELISA阳性表明近期接触过MPXV,而IgG捕获ELISA阳性表明该个体以前通过接种疫苗或自然感染接触过MPXV。在一个样本中同时存在IgM和IgG,表明在以前接种过疫苗或接触过自然感染MPXV的个体。然而,正痘病毒具有血清学交叉反应性,抗原和抗体检测方法不能提供猴痘特异性确认,但对于MPXV流行地区的血清学检测也许是可行的方法。

猴痘抗原检测对人体血清、血浆、全血、咽拭子、唾液或病灶渗出物等标本进行测试，以确定是否存在猴痘病毒抗原。猴痘病毒IgM/IgG抗体检测使用几滴血液来寻找人体在感染猴痘后产生的抗体。

西宝生物已成功开发出多款猴痘病毒相关蛋白产品（原核表达/真核表达）。重组蛋白根据已发布的猴痘病毒基因序列进行设计,通过化学合成的方法获取MonkeypoxVirus基因序列,利用E.coli表达系统进行重组蛋白表达/纯化等获得。可用于抗原检测的阳性对照产品。

西宝研发团队还根据已开发的猴痘蛋白产品，作为为免疫原，借助快速单抗发现技术，筛选出近百株猴痘抗体，涉及A35R、B6R、A29L、M1R 4个关键表位，并成功配对高亲和力A35R抗体和A29L抗体。

猴痘抗原抗体产品清单：

猴痘病毒（Monkeypox virus）MPXV抗原可用于病毒疫苗、诊断试剂开发及基础研究的工具试剂
货号	EDD0683B	EDD0689B	EDD0690B	EDD0691B
基因名	A29L	A35R	B6R	M1R
靶点介绍	A29L是细胞内成熟病毒（IMV）表面包膜蛋白（与牛痘病毒VACV,A27同源）。细胞内成熟病毒（IMV）表面包膜蛋白，介导病毒对宿主细胞的识别作用。	A35R与牛痘病毒的A33R高度相似，是一种细胞外包膜病毒（EEV）特异性II型膜糖蛋白，在有效的EEV形成中起着关键作用，并有助于病毒颗粒的有效细胞间传播，是开发猴痘病毒治疗性抗体的潜在靶点。	B6R是宿主范围蛋白，位于细胞外包膜病毒粒子（EEV）的膜上，与牛痘病毒补体控制蛋白B5同源，参与补体激活的负调节。研究表明B5依赖于与A33或A34的相互作用，以定位到细胞内包膜的位点，并能相互结合释放到细胞外病毒体的包膜中。B5对于有效生产感染性EV很重要，A33，A34，B5三者复合物在ER退出以及三种糖蛋白正确定位到包裹的细胞内部位中起作用。	M1R与牛痘病毒L1蛋白同源，是一种在成熟IMV颗粒表面发现的跨膜蛋白。由L1R ORF编码，高度保守，参与病毒粒子组装，在病毒进入和成熟过程中发挥重要作用。L1是诱导低pH触发的细胞-细胞融合所必需的，且对牛痘病毒复制很重要。
纯度	大于 90% ， SDS-PAGE
缓冲液	1x PBS，pH 7.4
储存	-80℃分装保存，避免反复冻融
用途	用于猴痘病毒感染后的IgG/IgM以及总抗体检测

猴痘病毒（Monkeypox virus）MPXV抗体可用于病毒疫苗、诊断试剂开发及基础研究的工具试剂
货号	EKY0470A / EKY0470B	EKY0471A / EKY0471B	EKY0472A / EKY0472B
免疫原	猴痘病毒A29L蛋白重组抗体（MPXV-A29L-Antibody）	猴痘病毒A35R蛋白重组抗体（MPXV-A35R-Antibody）	猴痘病毒B6R蛋白重组抗体（MPXV-A35R-Antibody）
应用	ELISA、免疫层析
纯度	大于 90% ， SDS-PAGE
缓冲液	1x PBS，pH 7.4
储存	-80℃分装保存，避免反复冻融