抗体结合亲和配基的选择

来源：作者：人气：-发表时间：2023-09-28 09:06:00【大中小】

通常我们在做抗体纯化实验时，都会用到亲和填料，亲和填料特异性极强，分辨率高，选择合适的亲和填料对分离抗体至关重要。那么我们科研和生产中又该怎么去选择呢？以下有小编分享的选择思路：

1）首选protein A

Protein A有耐碱形式的突变体，它更加稳定，脱落更少。因此，在protein A可以结合的情况下，它的一些纯化性质比protein G/L更加清楚，首选protein A亲和填料。选择protein A亲和填料，需要配套选择pH8.5-9.0的结合缓冲液，实现更好的结合。

2）次选protein G

羊抗体和protein A结合性质不好，小鼠的IgG1和proteinA结合也不好，此时可以选择protein G，人的抗体和protein A/G结合都不错，但考虑到盐浓度，pH梯度等影响，选择protein G操作更简单，方便，只要使用PBS对样品进行一定程度的稀释，就可以很好的和protein G亲和填料结合。

3）protein L的选择

在protein A/G的结合效果都不好的时候，protein L是一个很好的补充，它结合抗体的kappa轻链。对于多抗来说，需要判断kappa和lamda轻链的比例，如果lamda轻链的比例占优势，使用protein L纯化，将损失较多的目的抗体。对于单抗来说，如果不管是鼠抗，还是兔抗，kappa链都占有优势，可以尝试protein L纯化。这种填料纯化的纯度也很不错，但是请注意的是：kappa轻链也有多种亚型，并不是每一种都可以和protein L结合。

4）thiophilic resin的选择

有一些单抗，对于protein A/G/L的结合都不好，在优化了pH、盐浓度之后，还是解决不了问题。此时可以尝试亲硫胶纯化（thiophilicresin）。这种填料和抗体之间的结合并不是十分特异，基本上通过缓冲液中的硫酸根的侨联作用和目标分子上的巯基发生作用。要提高纯度的话，推荐使用盐的梯度洗脱（硫酸盐从500 mM逐渐降低）。这种填料的优势在于，洗脱条件非常温和（可以PBS洗脱），对于不稳定的抗体来说，有重要价值。

5）抗原亲和填料的选择

以上这些抗体纯化填料，并不能区别特异性抗体与非特异性抗体。要获得特异性最高的抗体，可以使用抗原亲和柱。常规能够偶联抗原的填料包括：氨基活化填料、羧基活化填料、醛基活化填料、NHS活化填料、碘乙酸活化填料等，经典的溴化氰活化填料偶联速度快，载量高，受到欢迎。但要注意：溴化氰活化填料稳定性较差，容易造成抗原脱落，并不是最好的选择。

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