Ludger单糖分析

来源：作者：人气：-发表时间：2015-04-20 13:07:00【大中小】

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单糖分析是监管机构在生物制药表征的产品标准规格指南中提出的一个要求。单糖分析可用于在药物开发的各个阶段，作为确定糖基化（N-连接和/或O-连接）类型和糖基化程度的方法。它也可以用于证明在实际生产过程中多批次之间大量释放的质量控制检测的一致性。较广泛使用的单糖分析方法如下：

通过轻度酸水解放糖蛋白上的单糖。
释放的单糖用2-氨基苯甲酸（2-AA）进行荧光标记。
用HPLC或UHPLC柱对2-AA标记的单糖进行定量分析。

LudgerTag™单糖释放和标记试剂盒（货号：LT-MONO-96）可以提供所有需要的从糖蛋白释放中性和氨基单糖以及2-AA标记的功能。该试剂盒包含有96个糖蛋白样品（可用于每个大约50 μg的糖蛋白）的试剂和材料。

它包括含6个单糖单独混合的定量标准品。该单独混合标准品能校准试验仪器，从而可以定量的确定糖蛋白的单糖组成。

我们建议用五点校准曲线为此标准品进行校准，这在试剂盒说明书中有详细说明。

木糖是一种通常存在于植物和昆虫的单糖，但不是哺乳动物或酵母表达载体的单糖。此试剂盒也包含了木糖。它可以被用来作为内参使用（即在标记之前加入到每个样品）。这样能补偿样品在处理过程中发生的移液或样品制备误差的损失。我们还建议纯化糖肽标准品，是LudgerBioQuant™首创量化的标准品，作为阳性对照。

这个定量标准品（货号：BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一个复杂的N-连接双触角聚糖，终止于两个N-乙酰氨基酸。使用此标准品将可以检查聚糖的释放、标记和回收的有效性，并可以增加您的单糖测定准确性。

根据您实验室的需求，我们提供两种色谱柱对标记的单糖进行分析。如果使用高效液相色谱法（HPLC），我们建议使用LudgerSep™R2柱（货号: LS-R2-4.6×150），它能有效的分离在大部分N-连接和O-连接聚糖中存在的七个主要单糖。如果使用超高效液相色谱（UHPLC），我们建议使用LudgerSep™UR2柱（货号: LS-UR2-2.1x50），它可在8分钟内分离每个样本。参见图1：

图1：用LudgerSep UR2 UHPLC色谱柱（货号: LS-UR2-2.1x50）分离的2-AA标记单糖标准品。

以下单糖都在8分钟内出峰：氨基葡萄糖（GlcN），氨基半乳糖（GalN），半乳糖（Gal），甘露糖（Man），葡萄糖（Glc），木糖（Xyl）和岩藻糖（Fuc）

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商品型号	英文品名	中文品名	包装
LT-MONO-96	Monosaccharide Release & Labeling Kit	单糖释放和标记试剂盒	2 Reaction Sets
LS-R2-4.6x150	LudgerSep R2HPLC Column	R2 HPLC 色谱柱	4.6 x 150 mm
LS-UR2-2.1x50	LudgerSep uR2UHPLC Column-monosaccharide	uR2 UHPLC 色谱柱-单糖	2.1x 50 mm
LS-R-BPTX10	LudgerSepR BPT Solvent	10倍BPT溶液	50ml
CM-MONOMIX-10	Mix of six monosaccharide quantitative standards (glucosamine, galactosamine, galactose, mannose, glucose/dextroseand fucose )	6个单糖混标准品 (葡萄糖胺, 半乳糖胺, 半乳糖, 甘露糖,葡萄糖和岩藻糖 )	10 nmol
BQ-GPEP-A2G2S2	A2G2S2 glycopeptide standard	A2G2S2 糖肽标准品（用于单糖释放和标记过程）	10 μg