生物制药表征分析工具酶

来源：作者：人气：-发表时间：2024-05-13 12:33:00【大中小】

背景

用作生物药物的治疗性抗体结构复杂，异质性高，在制造过程中需要严格监管和控制。抗体分子大小异质性是抗体的生产工艺优化、生产过程控制及放行分析中重要质控指标之一。为了确保单克隆抗体及其他生物分子药物的安全性和有效性，需要对这些药物进行全面深入的表征分析。

随着获批的抗体药物数量逐年急剧增加，例如mAb、Fc融合蛋白、Fab、ADC、双特异性抗体和双特异性T细胞接合剂(BiTE)，了解单个翻译后修饰(PTM)可以更好地分析和预测治疗性抗体的体内功效、药代动力学和作用机制。

治疗性抗体、融合蛋白等的表征通常从三个水平进行，包括自上而下的完整分子量水平、自下而上的多肽水平、亚基水平。常用作治疗性蛋白理化分析的工具酶有PNGase F酶、IdeS酶、Papain、GinsKHAN、GlySERIAS酶、肽图分析用的胰蛋白酶Trypsin、GluC、LysC、糜蛋白酶Chymotrypsin等。

Seebio可提供一系抗体/蛋白理化分析工具酶，用于协助单克隆抗体、融合蛋白药物、生物类似药等生物药的表征分析及其相关翻译后修饰，助力生物药物的开发和质量控制。

蛋白测序肽图分析

蛋白酶	酶切位点	特点
重组胰蛋白酶（质谱级）	赖氨酸和精氨酸残基中的羧基端	胰蛋白酶β型占比>80%；比活≥6200 USP U/mg（相当于18600 BAEE U/mg）强稳定性，冻融次数可达10次；和进口品牌比，肽段漏切率更低、蛋白鉴定数更高；批间差稳定，可提供相关法规支持文件。
重组赖氨酰内切酶(Lys-C)	赖氨酸羧基侧的酰胺、酯和肽键	可单独使用，也可与胰蛋白酶联用，鉴定更多的蛋白数以及磷酸化位点数目；在4M尿素或者0.1%SDS存在的情况下仍可保持较高的酶活性。
Glu-C蛋白酶	谷氨酸或天冬氨酸残基羧基端肽键	对于分析赖氨酸和精氨酸含量高的蛋白质，与胰蛋白酶联用可显著提高鉴定蛋白数目；适用于分离和富集磷酸化肽段；
重组人α-糜蛋白酶	酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸的羧基端肽键	特别适用于膜蛋白分析。

糖基化分析工具酶

糖苷酶	名称	酶切位点	特点
唾液酸修饰	唾液酸酶(a2-3,6,8)	糖蛋白和寡聚糖上通过a2-3,a2-6,a2-8键连接的唾液酸	可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸。
唾液酸修饰	唾液酸酶(a2-3,6,8,9)	糖蛋白和寡聚糖上通过a2-3,a2-6,a2-8和a2-9键连接的唾液酸	可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸；可以忍受0.5%-1.0%的去污剂。
N-糖基化修饰	PNGase F	天冬酰胺和最内侧的GIcNAc之间的糖苷键	适用于抗体和糖蛋白的N-糖基完全去除；可在变性与非变性条件下切割糖蛋白。
N-糖基化修饰	重组Endo H	N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构	适用于抗体或者其它糖蛋白的N-连接高甘露糖的完全去除。存储液中不含甘油。
O-糖基化修饰	O糖蛋白酶	粘蛋白型O-连接糖(无论是否唾液酸化)的丝氨酸或苏氨酸残基	适用于O-糖基化分析；无需唾液酸酶预先处理。

抗体切割酶

IdeS Protease和IdeZ Protease是分别来源于化脓性链球菌 (Streptococcus pyogenes)和马链球菌兽瘟亚种 (Streptococcus equi)的重组蛋白酶，该蛋白酶具有极高的底物特异性，能识别人等特定物种和特定类型的IgG，并在抗体铰链区下方的特定位点进行酶切，使IgG水解为完整的F(ab')2片段和Fc片段。IdeS/Z酶作为工具酶应用于抗体类药物的制备和结构表征分析，是用于表征治疗性抗体、单克隆抗体、抗体偶联药物、Fc融合蛋白和抗体-药物复合物的有价值的工具。

名称	酶切位点	特点
IdeS蛋白酶	特异识别IgG,并在IgG下铰链区的特定位点	可将lgG水解为完整的F(ab')2片段和Fc片段。
IdeZ蛋白酶	特异识别IgG,并在IgG下铰链区的特定位点	可同时作用于N-羟乙酰神经氨酸和N-乙酰神经氨酸；可以忍受0.5%-1.0%的去污剂。

标签切除工具酶

名称	酶切位点	特点
重组TEV蛋白酶（rTEV Protease）	严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。	一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶，较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强，具有高活性和高特异性的特点。

Seebio蛋白工具酶汇总

蛋白测序肽图分析
货号	产品名称	规格
DCE0060U	重组胰蛋白酶（质谱级，液体）	25ug 100ug
DCE0060T	重组胰蛋白酶（质谱级，冻干）	25ug 100ug
EXK0369B	重组赖氨酰内切酶	20ug
AXJ4266C	重组Glu-C蛋白酶，冻干	25ug 100ug
AXJ4266B	重组Glu-C蛋白酶	20ug 100ug
DCL0640B	重组人α-糜蛋白酶（冻干）	20ug 50ug 100ug
糖基化酶
>ECE0441E	PNGase F重组糖苷酶	20KU 40KU
DCE0447C	重组Endo H	3KU 15KU
DCE0448B	O糖蛋白酶	20U 100U
DCE0457F	唾液酸酶(α2-3,6,8)	500U 2KU 10KU
DCE0457E	唾液酸酶(α2-3,6,8,9）	2KU 10KU
抗体切割酶
ECE0711A	IdeS蛋白酶	700U
ECE0712A	IdeZ蛋白酶	1KU 2KU
标签切除工具酶
EBY3644A	Seebio®重组烟草蚀纹病毒蛋白酶（rTEV Protease）	1KU 5KU 10KU

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货号	产品名称	规格
ACH0011F	盐酸胍	1kg
DCH0005D	二硫苏糖醇（DTT）	5g，100g，250g，500g
AAU0091A	碘乙酸	1g，5g
ACC0030	三羟甲基氨基甲烷<结晶>(Tris base)	100g，500g，1kg，25kg
ACC0029	三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(TRIS-HCl)	250g，500g，1kg，25kg