糖类抗原15-3(CA15-3)-磁微粒化学发光法（AE/AP）解决方案

来源：作者：人气：-发表时间：2023-09-27 15:06:00【大中小】

1.项目背景

糖类抗原15-3(CA15-3)是粘蛋白1（Mucin1或MUC1）经水解后的一种可溶形式。

《乳腺癌诊疗指南（2022）》指出：CA15-3、癌胚抗原是乳腺癌中应用价值较高的肿瘤标志物，主要用于转移性乳腺癌患者的病程监测。CA15-3和癌胚抗原联合应用可显著提高检测肿瘤复发和转移的敏感性。由于其对局部病变的敏感性低，且在某些良性疾病和其他器官的恶性肿瘤中也可升高，因此不适合用于乳腺癌的筛查和诊断。有研究表明，CA15-3项目可用于辅助II期和III期乳腺癌患者的监控。对患者进行连续检测得到的CA15-3检测值应与其他临床方法联合用于监控乳腺癌。

2. 性能表现

针对糖类抗原15-3(CA15-3)的检测，西宝生物推出4种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）

2.1化学发光（AE）平台

组合1（两试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017I）包被羧基磁珠+糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017J）标记吖啶酯；

组合2（三试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）标记生物素+糖类抗原CA15-3单克隆抗体抗体（货号：EKY0017P）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；

组合3（两试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记吖啶酯；

线性范围：1 U/mL-300 U/mL；最低检出限：1 U/mL。

2.2化学发光（AP）平台

组合4（三试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）标记生物素+糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；

组合5（两试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记碱性磷酸酶；

线性范围：1 U/mL-300 U/mL；最低检出限：1 U/mL。

2.3稳定性评估

2.3.1 各组分工作液稳定性

采用磁珠标记物稀释液（货号：DCD0532A）分别将链酶亲和素磁珠、生物素标记CA15-3抗体浓缩液、磁珠包被CA15-3抗体浓缩液、吖啶酯标记CA15-3抗体浓缩液配置成工作液及采用碱性磷酸酶标记物稀释液（货号：DCD0534A）将碱性磷酸酶标记CA15-3抗体浓缩液配置成工作液，分别进行37℃热稳定性实验。如表1所示：

a.链酶亲和素磁珠工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内（不含S0），表明链酶亲和素磁珠工作液热稳定性良好；

b.生物素标记CA15-3抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内（不含S0），表明生物素标记CA15-3抗体工作液热稳定性良好；

c.磁珠包被CA15-3抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内（不含S0），表明磁珠包被CA15-3抗体工作液热稳定性良好；

d.吖啶酯标记CA15-3抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%左右（不含S0），表明生物素标记CA15-3抗体工作液热稳定性较好；

e.碱性磷酸酶标记CA15-3抗体工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±20%以内（不含S0），表明生物素标记CA15-3抗体工作液热稳定性较好。

表1 各组分工作液热稳定性7天数据（37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异）

序号	CA15-3抗原稀释浓度U/mL	链酶亲和素磁珠工作液	生物素标记CA15-3工作液	磁珠-包被CA15-3工作液	吖啶酯标记CA15-3工作液	碱性磷酸酶标记CA15-3工作液
S0	0	0.0%	-1.5%	1.2%	-5.6%	-1.6%
S1	3	-4.7%	-1.5%	0.4%	-9.6%	-17.1%
S2	10	-4.6%	-0.1%	-4.8%	-11.2%	-15.4%
S3	30	-4.5%	0.7%	-3.2%	-11.2%	-16.7%
S4	100	-2.9%	2.3%	-2.5%	-9.0%	-16.6%
S5	300	0.4%	5.6%	-2.7%	-9.5%	-17.4%
平均变化（不含S0）		-3.3%	1.4%	-2.5%	-10.1%	-16.6%

2.3.2 CA15-3抗原稳定性

采用磁珠标记物稀释液（货号：DCD0532A）将CA15-3抗原（货号：EKY0041C）稀释成5个梯度（液体型），进行37℃热稳定性实验。如表2所示；

a）CA15-3抗原稀释梯度（液体型）2-8℃热加速7天与-20℃储存7天发光值平均变化在±5%以内;

b）CA15-3抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与-20℃储存7天发光值平均变化在±5%以内;

c）CA15-3抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±5%以内;表明CA15-3抗原稀释梯度（液体型）稳定性良好。

表2 CA15-3抗原稀释梯度（液体型）热稳定性7天数据

序号	CA15-3抗原稀释浓度浓度U/mL	CA15-3 抗原稀释梯度（液体型）	CA15-3 抗原稀释梯度（液体型）	CA15-3 抗原稀释梯度（液体型）
序号	CA15-3抗原稀释浓度浓度U/mL	2-8℃热加速7天与-20℃储存7天发光值均值差异	37℃热加速7天与-20℃储存7天发光值均值差异	37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
S0	0	2.7%	-11.0%	-13.3%
S1	3	-3.1%	-3.4%	-0.3%
S2	10	1.8%	3.1%	1.3%
S3	30	0.7%	0.4%	-0.3%
S4	100	-1.6%	-2.4%	-0.8%
S5	300	0.9%	-1.0%	-1.9%
平均变化（不含S0）		-0.2%	-0.7%	-0.4%

3临床相关性

3.1化学发光（AE）平台

西宝CA15-3抗体配对组合1（两试剂模式）的测试临床样本与罗氏CA15-3试剂赋值的临床样本（相关性R²在0.93左右，相关性较好；

西宝CA15-3抗体配对组合2（三试剂模式）的测试临床样本与罗氏 CA15-3试剂赋值的临床样本（相关性R²在0.94左右，相关性较好；

西宝CA15-3抗体配对组合3（两试剂模式）的测试临床样本与罗氏 CA15-3试剂赋值的临床样本（相关性R²在0.93左右，相关性较好；

3.2化学发光（AP）平台

西宝CA15-3抗体配对组合4（三试剂模式）的测试临床样本与罗氏 CA15-3试剂赋值的临床样本相关性R²在0.94左右，相关性较好；

西宝CA15-3抗体配对组合5（两试剂模式）的测试临床样本与罗氏 CA15-3试剂赋值的临床样本（相关性R²在0.91左右，相关性较好。

4.测试方案

特别注明：

1）若采用吖啶酯体系，建议CA15-3抗体与吖啶酯的标记摩尔比在1:4左右；

2）若采用碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶体系，建议优化酶与抗体标记的摩尔比例。

4.1化学发光（AE）平台

4.1.1化学发光（AE）平台抗体配对组合1

待测样本:预稀释样本加样量20ul；采用合适的稀释液将样本稀释10倍；

试剂1：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017I）-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017J）-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul预稀释样本（10倍稀释）+50ul试剂1混合，37℃孵育9min，清洗；

第二步：加入50ul试剂2混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

4.1.2化学发光（AE）平台抗体配对组合2

待测样本:预稀释样本加样量20ul；采用合适的稀释液将样本稀释10倍；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul预稀释样本（10倍稀释）+50ul M试剂+50ul 试剂1混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

4.1.3化学发光（AE）平台抗体配对组合3

待测样本:预稀释样本加样量20ul；采用合适的稀释液将样本稀释10倍；

试剂1：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul预稀释样本（10倍稀释）+50ul试剂1混合，37℃孵育9min，清洗；

第二步：加入50ul试剂2混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。

4.2化学发光（AP）平台

4.2.1抗体配对组合4（三试剂模式）：

待测样本:预稀释样本加样量10ul；采用合适的稀释液将样本稀释10倍；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：10ul预稀释样本（10倍稀释）+50ul M试剂+50ul试剂1混合，37℃孵育10min；

第二步：加入50ul 试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入底物，进行测试。

4.2.2抗体配对组合5（两试剂模式）：

待测样本:预稀释样本加样量10ul；采用合适的稀释液将样本稀释10倍；

试剂1：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：10ul预稀释样本（10倍稀释）+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，进行测试。

测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。

5.产品信息(可提供大包装试剂)

产品名称	货号	推荐配对
糖类抗原CA15-3单克隆抗体	EKY0017I	组合1（两试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017I）包被羧基磁珠+糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017J）标记吖啶酯；组合2（三试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）标记生物素+糖类抗原CA15-3单克隆抗体抗体（货号：EKY0017P）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；组合3（两试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记吖啶酯；组合4（三试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017PO）标记生物素+糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；组合5（两试剂模式）：糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）包被羧基磁珠+糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）标记碱性磷酸酶；
糖类抗原CA15-3单克隆抗体	EKY0017J
糖类抗原CA15-3单克隆抗体	EKY0017P
糖类抗原CA15-3单克隆抗体	EKY0017O
糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017I）-羧基磁珠浓缩液	DKY1319A
糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017J）-吖啶酯浓缩液	DKY1319B
糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）-羧基磁珠浓缩液	DKY1319C
糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017O）-生物素浓缩液	DKY1319D
糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P）-吖啶酯浓缩液	DKY1319E
糖类抗原CA15-3单克隆抗体（货号：EKY0017P） -碱性磷酸酶浓缩液	DKY1319F
羧基磁性微球，1.2um	DEG0800D
链霉亲和素磁性微球，1.5um	DEG0814A-10ml
AMPPD 发光底物液（即用型）	DCD0517B
重组碱性磷酸酶（高活性）	DCE0108L
磁珠标记物稀释液（化学发光）	DCD0532A
糖链抗原CA153抗原，校准质控	EKY0041C
APS-5发光底物液（即用型）	ECD0532M-100ml
CA153碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（化学发光）	DCD0534A