无缝克隆试剂盒

来源：seebio.cn作者：西宝生物人气：-发表时间：2012-08-22 10:51:00【大中小】

传统的PCR产物克隆方法主要有两种：一种是PCR引物设计时引入载体上的酶切位点，PCR产物经双酶切后定向克隆到目的载体上；另一种是TA载体连接。这两种方法费时费力，过程繁冗。

无缝克隆和组装技术是一种新的、快速、简洁的克隆方法，旨在克服上述缺陷，它可以在质粒的位点进行一个或多个目标DNA的片断的插入，而不需要限制性内切酶和连接酶。突破传统的双酶切再加上连接，只需要一步重组法，即可得到高效率克隆的重组载体。上海西宝生物提供无缝克隆试剂盒，提高您的工作效率，让您的工作变得轻松。

技术原理：

基因克隆的引物设计及目的DNA片段的扩增，与常规PCR法是相同的。差异在于载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基，由此得到的PCR产物两端便分别带上了15-20个与载体序列同源性的碱基。

技术特点：

1、位点选择灵活：载体任意位置基因克隆；
2、快速简便：大约30分钟完成载体构建；
3、精确：不需要增加额外的程序；
4、克隆效率高，阳性克隆高达90%以上；
5、一次进行多片段目的基因的重组

引物设计方法：

无缝克隆操作过程：

1. 采用酶切或PCR扩增方法将就体线性化。
2. 使用设计好的引物进行目的DNA片段的PCR扩增（引物设计见说明书）。
3. 将目的DNA片段和线性化载体以摩尔比2.1加到试管中进行重组反应：
a. 反应液 15μl
b. 线性化载体 x μl
c. PCR片断 x μl
d. H2O x μl
-------------------------
总体积 20 μl
4. 混匀后在50℃孵育30分钟，然后转移到冰上。 5. 使用5μl反应液转化到感应态细菌中。
详细操作步骤参见具体说明书。

应用：

1、片断克隆，片断组装，突变构建；
2、基因表达，成膜，小RNA等功能研究；
3、蛋白质突变研究；
4、应用合成生物学；
5、代谢工程，菌株改造。

订购信息：

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