环氧活化偶联介质——层析介质优选西宝生物

来源：作者：人气：-发表时间：2015-10-15 14:55:00【大中小】

Epoxy活化偶联介质可用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联，应用十分广泛。西宝生物Epoxy-activated QZT 6FF活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，采用环氧活化的方法活化琼脂糖上的羟基，活化后即可直接用于各种配基的偶联。西宝生物Epoxy-activated QZT 6FF活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广（偶联氨基、巯基和羟基）的优点。

一、产品特性

环氧活化偶联介质的理化性质和产品特性如表1所示。

表1 环氧活化偶联介质的理化性质和产品特性

参数	指标
基质*	6%交联琼脂糖凝胶
活化基团	环氧基
形状	球形
介质平均粒径	90 μm (45-165)
活化基团密度	20-40 μmol/ml wet gel
偶联条件	pH 9-13，温度20-40℃，时间5-24 h，可以在水相或者有机相中偶联
最高流速（25℃）	600 cm/h
推荐流速	<150 cm/h
最高耐压	0.3 MPa (3 bar)
保存	-20℃（异丙醇）

*：除6FF基质外，也可以提供4B、4FF和6B基质的环氧活化介质。

二、应用范围

西宝生物Epoxy活化偶联介质广泛用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联。

三、操作步骤

具体的操作步骤如下（以10 mL活化胶偶联BSA为例）：

清洗：用10-20倍胶体积的去离子水冲洗（大于5次）保存于异丙醇的环氧活化胶，除去异丙醇，抽干，将10 mL（约7.5 g）加入到30 ml的反应器（磨口三角瓶）中，备用。
偶联：称取100 mg BSA，溶解于15 mL 0.1 M碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（pH 10.5），加入到抽干的活化胶中，在摇床上振荡，37℃偶联12-24 h；反应完毕后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，收集料液用于未偶联 BSA的分析和偶联配基密度的计算，偶联配基的微球水洗后抽干。其他配基的偶联方法与BSA类似，但反应条件（pH、温度、时间、配基加入量）需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。若配基含有游离巯基，可选用0.1 M硼砂-硼酸缓冲液，pH 8.6，通过巯基进行偶联。（偶联注意事项：偶联氨基可选用pH 9-13的缓冲液，偶联巯基可选用pH 8.6的缓冲液；避免使用可以和环氧基反应的含氨基的缓冲液，可选用磷酸盐、碳酸盐、硼酸盐和氢氧化钠溶液；pH越高、温度越高，偶联速度越高；时间越长，偶联反应越彻底，但偶联条件的选择还要兼顾配基的稳定性。）
封闭：将10 mL抽干的偶联BSA的胶加入到100 mL三角瓶中，加入30 mL 1 mol/L乙醇胺，pH 10.5溶液（或0.1 mol/LTris-HCl，pH 10.5）。反应温度恒定在37℃，搅拌速度120 rpm，反应时间4 h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，用去离子水清洗。
清洗：偶联BSA的介质依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）、去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH 8.0）和去离子水充分洗涤（重复交替清洗3次），抽干，去除未反应的配基。
保存：保存于4℃、20%乙醇溶液中。

四、特色服务

（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。

（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。

（3）按客户要求提供各种规格的预装柱。

（4）为客户提供专业的售前和售后服务。

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