NHS活化偶联介质——层析介质优选西宝生物

来源：作者：人气：-发表时间：2015-10-15 14:40:00【大中小】

NHS活化偶联介质可用于各种含有氨基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联，应用广泛。西宝生物NHS-activated QZT 4FF活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，经过一系列的活化、偶联步骤，并形成活化酯，在温和的条件下就可以偶联各种带氨基的配基。NHS-activated QZT 4FF活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

一、产品特性

表1 NHS活化偶联介质的理化性质和产品特性

基质	4%交联琼脂糖凝胶
活化基团	NHS
形状	球形
介质平均粒径	90 μm (45-165)
活化基团密度	18-25 μmol/mL wet gel
偶联条件	pH 6-9, 4℃–室温, 2-24 h
流速可高达（25℃）	450 cm/h
推荐流速	150 cm/h
耐压可高达	0.3 MPa (3 bar)
保存	-20 ℃（100%异丙醇）

*：除4FF基质外，也可以提供4B、6FF和6B基质的NHS活化介质。

二、应用范围

西宝生物NHS-activated QZT 4FF活化偶联介质广泛用于各种含有氨基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联。

三、操作步骤

具体的操作步骤如下（以4 mL活化胶偶联BSA为例）：

清洗液：1 mM HCl，100 mL，4度预冷；偶联缓冲液：0.2 M NaHCO₃+0.5 M NaCl，pH 8.3，50 mL。

准确称取40 mg BSA溶于4.0 mL 0.2 M NaHCO₃+0.5 M NaCl，pH 8.3缓冲液，溶解完全后备用。
将约4 mL NHS活化胶用4度预冷的1 mM HCl洗3-5次后抽干，再用0.2 M NaHCO₃+0.5 M NaCl，pH 8.3清洗2次，抽干后将4 mL NHS活化胶（约3.0 g）加入到10 mL的反应器（磨口三角瓶或离心管）中（注意：清洗后应立即使用）。
将BSA溶液加入到活化胶中，反应温度恒定在4℃（或室温/25℃），摇床中振荡混合（离心管水平放置），转速120 rpm，反应过夜（或5h）。
反应停止后，静置，取上清离心（3000 g，5 min，室温），收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析（可采用Bradford、Lowry、BCA法，NHS 在280 nm有强吸收，不能采用OD280测定蛋白浓度），计算偶联的BSA的配基密度；将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。
封闭未反应的NHS：将4 ml抽干的BSA亲和胶加入到25ml磨口三角瓶中，加入9 ml 0.5 mol/L乙醇胺+0.5 M NaCl，pH 8.3溶液（或0.1 mol/LTris-HCl，pH 8.3）。反应温度恒定在4℃（或室温/25℃），搅拌速度120 rpm，反应过夜（或5 h）。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，用去离子水清洗。
清洗：将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）、去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH 8.0）和去离子水充分洗涤（重复交替清洗3次），抽干，去除未反应的配基。
保存：制得的BSA亲和介质保存于4℃、20%乙醇溶液中。

备注：其他配基的偶联方法与BSA类似，但反应条件（pH、温度、时间、配基加入量）需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。

注意事项：偶联缓冲液可用碳酸盐和磷酸盐等缓冲液，但不能使用含有氨基的Tris等缓冲液。

四、特色服务

（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。

（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。

（3）按客户要求提供各种规格的预装柱。

（4）为客户提供专业的售前和售后服务。

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