羧基活化偶联介质——层析介质优选西宝生物
参数
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指标
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基质
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4%交联琼脂糖凝胶
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活化基团
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羧基
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形状
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球形
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介质平均粒径
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90 μm (45-165) |
活化基团密度
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12-18 μmol /ml wet gel |
偶联条件
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pH 4.5, 4 oC–室温, 2-24h |
流速高达(25℃)
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450 cm/h
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推荐流速
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150 cm/h
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耐压高达
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0.3 MPa (3 bar) |
保存
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-20 oC(100%异丙醇)
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- 将约4 mL ECH活化胶水洗3-5次后抽干,再用稀HCL,pH 4.5溶液清洗2次,抽干后将4 mL ECH活化胶(约3.0 g)加入到10 mL的反应器(磨口三角瓶或离心管)中,备用。
- 准确称取40 mg BSA溶于4.0 mL稀HCl, pH 4.5溶液,溶解完全后加入84 mg EDC.HCl,溶解完全后测量其pH是否为4.5,否则需调到4.5,备用。
- 将BSA溶液加入到活化胶中,反应温度恒定在4℃或25℃,摇床中振荡混合(离心管水平放置),转速120 rpm,反应时间24 h(反应前1小时pH有明显的下降,可在15、30、45、60 min时测量pH并加入适量稀NaOH 调pH至4.5)。
- 反应停止后,静置,取上清离心(3000 g,5 min,室温),收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析,计算偶联的BSA的配基密度;将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。
- 封闭未反应的ECH:一般不需要封闭,如需封闭未反应的羧基,可在偶联反应后(注意是在清洗前)直接往反应物中加入4.2 mL 1 M 氨基葡萄糖或乙醇胺,继续反应4h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干,用去离子水清洗。
- 清洗:将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)、去离子水、0.1M含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液(pH 8.0)和去离子水充分洗涤(重复清洗3次),抽干,去除未反应的配基。
- 保存:制得的BSA亲和介质保存于4℃、20%乙醇溶液中。
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