肝素亲和介质——层析介质优选西宝生物

来源：作者：人气：-发表时间：2015-10-16 09:24:00【大中小】

肝素（Heparin）是一种含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子III、凝血酶、类凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII，也能和大肠杆菌表达的人白介素、人前列腺生长因子、重组人血管内皮生长因子、软骨生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组肝细胞生长因子、重组鼠肝素辅因子II、重组人血小板第四因子、重组人内皮抑素、重组人角质细胞生长因子等生物大分子结合，所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。

西宝生物肝素亲和层析介质（Heparin QZT 6FF）以高交联琼脂糖为基质，采用环氧活化工艺，将肝素偶联到琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，使用寿命长，使用方便，应用广泛。

一、产品特性

Heparin QZT 6FF亲和介质的理化性质和产品特性如表1所示。

表1 Heparin QZT 6FF亲和介质的理化性质和产品特性

参数	指标
基质	6%交联琼脂糖凝胶
配基	Heparin
形状	球形
介质平均粒径	90 μm (45-165)
配基密度	3.5 mg heparin/mL wet gel
动态载量	2 mg AT III/mL wet gel
流速高达（25℃）	600 cm/h
推荐流速	<150 cm/h
耐压高达	0.3 MPa (3 bar)
pH稳定性	4-12（长时间）；4-13（短时间）
保存	4-8 ℃（0.05 M乙酸钠+20%乙醇）

二、应用范围

西宝生物肝素亲和层析介质广泛用于抗凝血因子III、凝血酶、类凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII等生物大分子的分离纯化。

三、操作步骤

层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。

平衡：用5-10CV的平衡缓冲液（20-50 mM PB或Tris/HCl，pH 7.4-8.0，可加入0.15 M NaCl抑制非特异吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。
进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（20-50 mM PB或Tris/HCl+1-2 M NaCl，pH 7.4-8.0，NaCl浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整）洗脱，收集流出液。可采用线性梯度或阶越式梯度洗脱。
原位清洗：为了避免不同样品间的相互干扰，或者当介质污染比较严重时（反压增加），需要对介质进行在位清洗。

（1）对于以离子键结合的蛋白，可用2-3 CV以上的2 M NaCl清洗，并用3 CV以上的纯水冲洗。

（2）对沉淀或变性蛋白蛋白，可用0.1 M NaOH清洗（1-2 h），并用3-10 CV平衡液和3 CV以上的纯水冲洗。也可用6 M Gua-HCl或8M urea清洗（0.5-1 h）。

（3）对疏水性结合的蛋白，可用0.1-0.5%的非离子去污剂清洗（1-2 h），并用3-10 CV的纯水冲洗。

其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

四、具体应用实例

转基因羊奶中抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）的分离纯化

层析柱：2.5 cm × 1.0 cm I.D.，CV=2 mL

样品：预处理的转基因羊奶（0.45 µm滤膜过滤，上样10 mL）

平衡缓冲液（A）：50 mM Tris/Hcl, pH 7.2

洗脱缓冲液（B）：50 mM Tris/Hcl+1 M NaCl, pH 7.2

流速：1 mL/min