Protein G亲和介质——层析介质优选西宝生物

来源：作者：人气：-发表时间：2015-10-16 09:18:00【大中小】

Protein G能特异性地与抗体的Fc区结合，所以Protein G亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。西宝生物Protein G亲和介质以高流速的琼脂糖凝胶为基质，以重组Protein G为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便，应用广泛。

一、产品特性

Protein G QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性如表1所示。

表1 Protein G QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性

参数	指标
基质	4%交联琼脂糖凝胶
配基	r-Protein G
形状	球形
介质平均粒径	90 μm (45-165)
配基密度	~3 mg Protein G/ml wet gel
动态载量	20-25 mg h-IgG/ml wet gel
最高流速（25℃）	450 cm/h
推荐流速	<150 cm/h
最高耐压	0.3 MPa (3 bar)
pH稳定性	3-10（长时间）；2-11（短时间）
保存	4-8 ℃（20%乙醇）

二、应用范围

Protein G QZT 4FF广泛用于各种抗体的分离纯化。

三、操作步骤

层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。

平衡：用5-10CV的平衡缓冲液（20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，添加适当浓度的NaCl抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。
进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45 μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（20 mM柠檬酸，pH 2.5-3.5；或0.1 M甘氨酸，pH 3.0；或20 mM乙酸钠，pH 3.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和pH或添加剂）的优化洗脱，收集流出液。洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如1 M Tris/HCl, pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。
再生、原位清洗：介质使用数次（5-10次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、在位清洗。

（1）用0.1 M的乙酸或0.1 M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5 CV，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；

（2）也可用70%乙醇或6 M盐酸胍淋洗柱子3-5 CV，并用3-10 CV的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。

其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

四、具体应用

载量分析：利用人免疫球蛋白（血浆来源，纯度95%，3 mg/mL）进行载量分析（柱体积2 ml；Buffer A：20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，Buffer B：0.1 M甘氨酸，pH 3.0；流速：0.5 mL/min；上样量：25 mL），层析谱图如图1（A：西宝介质；B：进口介质）所示，结果表明两种介质的层析谱图（穿透行为、洗脱峰）基本一致，无明显差异。洗脱峰的蛋白浓度分析结果表明，二者的载量相当，均在20-25 mg h-IgG/mL介质之间。
纯化效果分析：利用小鼠腹水（Buffer A稀释4倍）上样进行亲和层析，考察介质的分离纯化效果（柱体积2 mL；Buffer A：20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，Buffer B：20 mM柠檬酸，pH 3.0；流速：0.5 mL/min；上样量：4 mL），层析谱图如图2所示，纯度分析结果表明，经过一步亲和层析，即可得到纯度95%以上的IgG（图3）。

五、特色服务

（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。

（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。

（3）按客户要求提供各种规格的预装柱。

（4）为客户提供专业的售前和售后服务。

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